高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞电泳影响研究.pdf

高效毛细管电泳分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞电泳影响 季宇彬，陈学军，汲晨锋 (哈尔滨商业大学药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076) 摘要：目的分析芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞电泳迁移能力的影响。方法高效毛细管电泳法。结果 芦笋多糖能减低荷瘤小鼠红细胞的电泳迁移时间，使之更接近正常红细胞，三个剂量组作用均非常 显著(P<0．01)。结论芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞有保护作用，这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。 关键词：芦笋多糖；红细胞：高效毛细管电泳 笋(AsparagusojficinalisLinn)，学名石刁柏，又名龙须菜、文山竹、索罗罗，是百合科天门冬属 多年生草本植物。以往研究表明，芦笋含有皂苷、黄酮、多种氨基酸、多种维生素、硒、锌、铁及蛋白质、 糖等多种营养成分，具有防治肿瘤的作用…，我们的前期研究结果表明，芦笋多糖的抗肿瘤作用确切， 本实验采用高效毛细管电泳法初步研究了芦笋多糖对荷瘤小鼠红细胞功能的影响，揭示其抗肿瘤作 用的机制。 l实验部分 1．1实验材料 4-2．0 1．1．1实验动物及瘤株昆明种小鼠，体重20g，雄性，哈尔滨医科大学动物实验中一ti'提供；S180 (肉瘤)购白黑龙江省肿瘤医院。 1．1．2主要试剂芦笋多糖(哈尔滨商业大学药物研究所)，5一氟尿嘧啶(上海旭东海普药业有限公司， 重蒸水配制，使用前经O．22 gm的滤膜过滤。 1．13主要仪器P／ACE SystemMDQ毛细管电泳仪(美国Beckman公司)，离心机 1．2实验方法 1．2．1小鼠肿瘤模型的建立 将接种后7 min，腹部皮肤消毒后， d生长良好的的S180小鼠，颈椎脱臼处死，置75％酒精浸泡5 用无菌注射器抽取乳白色的浓稠腹水(3～5mL)，放入无菌容器内，置冰块中保存。另取少量腹水，置 于加有肝素的试管中，作为观察细胞形态及细胞计数用，癌细胞数为97％以上方可使用，腹水用无 菌生理盐水l：4稀释，使肿瘤细胞数为5×106／mL。取配制好的细胞悬液无菌操作小鼠左前腋皮下注 mL，制成实体瘤模型，整个操作应在30min内完毕【2J。 射接种，每鼠接种O．2 1．2．2实验分组、给药剂量及途径 小鼠随机分为6组，每组10只。多糖实验组：芦笋多糖低、中、高剂量组(25、50、100 rag／kg)； 阳性对照组：5一氟尿嘧啶25 h mg／kg；阴性对照组：生理盐水：正常对照组：生理盐水。于接种后24 mL／次，每日1次，连续7d，停药后24h眼球采血。 开始ip给药，每只小鼠0．2 1．2．3红细胞样品制备 新鲜血液加三倍体积生理盐水，3000r／min离心5min，清洗3次。准确吸取红细胞沉 淀100 7．4的磷酸盐缓冲液3 gL用0．1mol／L，pH mL稀释，血球计数板计数(7x105个／mL)。 1．2．4电泳条件的确定 1．2．4．1电压的选择 先后采用10、15、20、25kV等不同电压条件，结果在20kV电压下电泳电流稳定，图谱清晰， 分离效果好。 第七届全国毛细管电泳及相关微纳分离分析学术报告会文集 上海 I．2．4．2磷酸盐缓冲液浓度及pH值的选定 7．6：0．1 选用磷酸盐缓冲溶液，分别配制0．05mol／L，pH7．0、pH7．2、pH7．4、pH mol／L，pH7．0、pH 7．6；0．2