产肠毒素性大肠杆菌基因工程疫苗研究进展研究.pdfVIP

大会报告与文献综述部分 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分离鉴定与 毒力变异机制研究 王金宝 (山东农业科学院山东济南250loo) 产肠毒素性大肠杆菌基因工程疫苗研究进展 卫广森l’许崇波2 工程学院，辽宁大连116622) Escherichia 产肠毒素性大肠杆菌(EnterotoxigeniccD，f)是引起幼畜腹泻的主要病原菌。 从而大量繁殖，产生大量肠毒素，由肠毒素造成肠黏膜上皮细胞的病理性变化，导致幼畜腹 泻【lJ。ETEC所致的幼畜腹泻在我国广大养殖地区流行十分广泛，发病率和死亡率都很高， 即便是病愈存活的幼畜，其生长发育和生产性能也会受到严重影响，给畜牧业造成了极其严 重的经济损失。对由ETEc引起的腹泻，国内外长期采取药物治疗方法，但由于耐药菌株的 产生，药物治疗效果一般不甚理想，免疫预防则是一条非常有效的途径【2】。目前国内外对黏 附素和肠毒素进行了基因工程疫苗的研究，均取得了很好的成果，现将有关研究进展情况介 绍如下。 l大肠杆菌l(88一K99双价基因工程疫苗 关的DNA序列，作者将pTK8899．1 够有效地阻止ETEC的感染。1985～1987年间，免疫母猪7555头，产仔猪80753头，腹 泻发病率为1．92％，死亡率为O．35％；对照组母猪402头，产仔猪6001头，腹泻发病率为 的高密度发酵和抗原蛋白疫苗的生产工艺。这样制备的疫苗不含菌体，不需要甲醛处理，抗 原蛋白保持了天然空间结构，有利于诱导产生抗体。同时这种冻干制剂可以长期保存，便于 贮藏和运输，解决了疫苗应用中的“冷链”问题。 表面抗原的能力，其表达水平已达到或超过野生供体菌株，血凝效价达到25～26左右。用 黏附定居，从而达到预防腹泻的目的。该疫苗在全国各地区猪场，接种免疫了近10万头妊 +作者简介：卫广森1956．03．03，男，研究员，博士，博士生导师，预防兽医学 12 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 质粒在动物体内外扩散性试验研究。结果表明，采用皮下接种法，基本上排除了细菌发生直 接接触的机会，对防止有害基因扩散无疑是一个积极措施。细菌在猪体内的消长试验证明， 皮下接种本菌后，细菌被局限于接种部位，不会扩散到血液。若由于使用不当，发生疫苗散 落于体外，进入消化道，则可能造成质粒的扩散。然而从猪的模拟试验结果看，质粒的扩散 现象并未得到证实。分析原因有两个：一是质粒接合转移机率不高，这点在试管内的接合试 验已被证实：二是工程菌是实验菌株，比较脆弱，对动物宿主具有不适应性，从粪便排菌率 很低就证明了这一点。因此，工程菌的应用不会成为新的污染源，对生态环境不会产生人们 所预想的不良影响。另外，刘兴汉等ll啦!1 的基因工程疫苗也取得了较好的免疫效果。 2大肠杆菌l(88ac．L1％双价基因工程疫苗 李丰生等11 脂糖凝胶电泳分析，pMM085质粒的分子量为14．6 和反向间接血凝等几种试验测定K88ac抗原，结果都证明其抗原产量与亲本菌株基本相同。 对肠毒素抗原用被动溶血试验测定，结果表明其LTB的产量和亲本菌株的产量也基本相同。 多个猪场对不同品种进行MM．3疫苗免疫试验。免疫妊娠母猪3437头，产仔猪33060头， 不宜长期使用。为此，黄培堂等Il 基因，构建了一个既能表达LTB亚单位又能表达B．半乳糖苷酶的含四环素抗性基因的重组 果。用MM．6免疫妊娠母猪135头，产仔猪1 氏菌弱毒菌株中，转化的细菌仍保持沙门氏菌的形态、生化及抗原特性，同时可稳定地高效 从而为这两种细菌双价基因工程疫苗的构建提供了有效的候选菌株。他们应用已构建的仔猪 副伤寒一大肠杆菌腹泻双价基因工程活疫苗，分别以口服和肌注两种途径免疫妊娠母猪，用 原较高水平的抗体反应。 3大肠杆菌K99．F4l双价基因工程疫苗 菌株。甘露糖抗性血凝试验、玻板凝集试验和Westem 菌毛亚单位的分子量与其各自的野生菌株相同，分别是17．2KDa和29．8 明，免疫妊娠母羊4927只，产羔羊9