第三章-分子杂交与印迹技术.pptVIP

二、分子杂交 将任何具有互补核苷酸顺序的两条单链核酸分子放入同一个反应体系，两条互补链可通过复性重新缔合形成双链，这一过程成为核酸分子杂交。 （二） 探针的制备方法 制备方法： (1) DNA重组技术 (2) PCR扩增 (3) 化学合成 合成寡核苷酸探针注意原则 (1) 长度（50-300 bp); (2) G:C对含量40%-60%； (3) 探针内避免互补； (4) 避免同一碱基连续出现； (5) 与非靶序列有70%以上同源性或连续8个以上碱基序列 相同，最好不用。 四、应 用 1.检测特定生物有机体之间是否存在亲缘关系； 2.用来揭示核酸片段中某一特定基因的存在与否、拷贝数及表达丰度。 三、 Western印迹杂交 将待检测蛋白质（或酶）经PAGE电泳并染色后，转移到滤膜上固定，再用“抗体-抗原”免疫反应或“DNA-protein”结合反应鉴别滤膜上的蛋白质。 按待测核酸是否固定在固相支持物上分： 固-液相杂交 印迹杂交 原位杂交 液相杂交 按照杂交分子特性分 DNA-DNA杂交 DNA-RNA杂交 蛋白质杂交 第二节 核酸分子杂交的方法 一、Southern印迹杂交 此技术由Southern 1975年首先设计。被检测对象为DNA。 带有DNA片段的凝胶 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 琼脂糖电泳 至膜（尼龙