第二节 基因工程的酶学基础.pptVIP

第三节 DNA聚合酶和反转录酶 二、Klenow片段 　（一）基本性质 　　　大肠杆菌DNA聚合酶I经枯草杆菌蛋白酶处理，获得N端三分之二的大肽段，即Klenow片段。 　　　Klenow片段仍拥有5`→3`的DNA聚合酶活性和3`→5`的核酸外切酶活性，但失去了5`→ 3`的核酸外切酶活性。 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 二、Klenow片段 　（二）用途 　 1. 3’端补平：补平限制性内切酶切后形成的3’隐蔽端。 　 　2. DNA 3’末端标记:在3’隐蔽端加上放射性标记的dNTP。 5’ klenow klenow 5’ 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 二、Klenow片段 　（二）用途 3. cDNA第二链的合成 mRNA cDNA第一链 逆转录 cDNA第二链 klenow 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 引物 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 三、T4噬菌体DNA聚合酶 （一）T4 DNA酶的基本特性 　　　有3`→5`的核酸外切酶活性和5`→3的DNA聚合酶活性（降解单链更快） 。 　　　在无dNTP时，可以从任何3`-OH端外切 　 　　　在四种dNTP均存在时，聚合活性占主导地位 第三节 DNA聚合酶和反转录酶 三、T4噬