中国明对虾四倍体6种诱导方法的比较研究.pdfVIP

中国E}=f壳动物学会编辑 甲壳动物学论文集 第四辑 街辱圣肛缸2003年出版 THECHINESECRUSTACEANSOCIETYNo．4 14～424 TRANSACTIONSOF PP．4 中国明对虾四倍体6种诱导方法的比较‘ 张晓军 李富花 吴长功 周岭华 相建海 (中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室，青岛266071) 摘要：本文采用热沐克、冷抹克、细胞拴弛素B、6-DMAP、秋水仙素和咖啡因处理6种方 法．进行了中国明对虾四倍体诱导研究。通过抑制第一次卵裂，上述方法都获得了对虾四 倍体胚胎，最高诱导率接近100％；实验中初步优f匕了诱导条件，筛选了诱导方法，认为 热休克方法最佳：同时讨论了处理起始时间及持续时间对四倍体诱导率和旺眙孵化率的影 响受幼体的生长及存活。 关键词：中国明对虾 四倍体诱导热休克 随着人民生活水平的提高，优质水产品的需求量将越来越大。对虾养殖业非常有必 要采用海洋生物技术，通过生殖和遗传操作获得有较强生长力和抗逆优势的养殖品系， 带来经济效益。 以前的多倍体育种研究主要测重三倍体诱导研究。但实践中发现，不育的三倍{本在 能增产的同时，也阻碍了生产上的推广应用，这是由于它不能产生后代，必须经常育 种，从而增加了生产成本。所以，最理想的方式是先诱导四倍体。四倍体具偶数组染色 体，理论上是可育的，能繁殖四倍体后代，再以四倍体个体与二倍体个体杂交产生三倍 体，避免了经常诱导育种所带来的人力和物力的浪费。因此，多培体育种研究的主要方 向是四倍体诱导的研究(相建海，1999)。 chinensis)(相建海等， 对虾类的四倍体诱导只有在中国明对虾(Fenneropenaeus et 1992)和印度明对虾(F．indicus)(Aquacopa1．，1993)有过报道，但这些年来由于 该技术本身的难度以及重视程度的不足，一直没有更深入、更系统的研究，以至于对虾 四倍体诱导研究一直处于初级阶段，至今没有成为一项成熟的技术。 本文比较了热休克、冷休克、细胞松弛素B(CB)、6．二甲基氨基嘌呤(6一 DMAP)、秋水fnj素和咖啡因6种四倍体诱导方法，为中国明对虾多倍体育种工作提供 基础资料。 一、材料与方法’ f 实验用中国明对虾亲虾购自山东省日照、海阳等地，也有少量为中国科学院海洋所 水族楼培育并越冬的亲虾。三月下旬，水温达13～14(2时，改变光照周期，使亲虾白 ·本文由973课题G1999012009，国家自然基助。 ·416· 天产卵。产卵后收集处理，所用试剂CB、6一DMAP购自SIGMA公司，秋水仙素和咖 PCA—II 啡因为国产试剂。冷休克使用NESI。AB产RTE一21l水浴，流式细胞仪为Partec 型。 1．热休克处理 对虾产卵后，将虾卵收集到一系列小筛网(直径5．5cm，高5cm)中，；醇化膜举起 约10～20rain开始，每隔2min将一组虾卵放入由控温仪控制的海水浴中，每组处理时 间为1～30 rain不等，随产卵水温和水浴温度不同而相应调整，放入的时刻干Ⅱ水浴温度 也随产卵水温及室温不同而不同。处理完成后，迅速取出虾卵，放入20℃海水中孵ft： 显微镜下观察虾卵的发育，使用流式细胞计检测胚眙和无节幼体的倍性。 2．冷休克处理 冷休克诱导的操怍过程与热休克相似，只是将热水浴变为冷水浴，处理温度为4～ 10℃，处理持续时间从5～30rain不等，起始时间随产卵水温和水浴温度不同而相应调 整。 B)处理 3．CB(Cytochalasin 在三个搪瓷盘中将CB溶解于海水形成浓度梯度，分别有0．1，0．2，0．4，0．6， 0．8，1．0，