微生物学检验(第3版)2012肠球菌与血液标本.pptVIP

肠球菌的微生物特性 1、形态与染色：肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或链状排列的卵员形革兰氏阳性球菌。 2、菌落特点：肠球菌在血平板上形成灰白色、不透明、表面光的小菌落，菌落周围可出现α溶血环，也可无溶血环。 生化反应 1、胆汁－七叶苷试验： 原理：培养基中除有Fe2+外，还有胆汁。胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。肠球菌和D群链球菌都能在含有胆盐的培养基中生长并水解七叶苷，生成七叶素，七叶素与培养基中枸橼酸铁的Fe2+反应形成黑色沉淀，使培养基变黑色。 方法：将被检菌接种胆汁－七叶苷培养基，35oC孵化18－24小时。 结果判断和报告：细菌生长，且培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。此试验是鉴定肠球菌的重要试验，但不能分D群中的肠球菌与非肠球菌。 2、65g/L NaCl生长试验： 原理：肠球菌具有很强的耐盐能力，能在65g/LNaCL血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。 方法：将被检菌接种65g/LNaCL血清肉汤培养基中，35oC孵化18－24小时。 结果判断和报告：细菌生长且培养基变黄色为阳性，细菌不生长且培养基不变色为阴性。此试验是鉴定肠球菌和D群链球菌的重要试验，前者为阳性，后者为阴性。 肠球菌、D群链球菌和乳球菌属的鉴别 试　　验　　 肠球菌属　D群链球菌　乳球菌属 胆汁－七叶苷试验　　+　　　+　　　　　　+ PYR试验　　　　　　+　 　 -　　　　 - 65g\LNaCl生长　　 +　　 -　　　　　 V 45oC生长　　　　　 +　　　 -　　　　　 - 注：“+”为90%以上菌株为阳性，：“-”为90%菌株为阴性，“V”为11－89%菌株为阳性。 血液标本的细菌学检验 及肠球菌的鉴定 目的要求 掌握血液标本增菌培养技术和常见致病菌的检验方法。 掌握肠球菌属的分离培养与鉴定方法及菌落特性、生化反应、形态特点及培养特性。 器材和试剂 菌种：肠球菌。 培养基：血平板、SS平板、胆汁七叶苷培养基、65g/L NaCl血清肉汤培养基。 试剂：革兰氏染液。 标本：血液标本。 其他：清洁载玻片、生理盐水、接种环、接种针、洒精灯、火柴、35oC培养箱、显微镜、香柏油、擦镜纸等。 血瓶的配制： 血液培养基的种类很多，但共同的是均含有三组成分：一是支持细菌生长的营养物质；二是预防血液凝固的成分；三是抑制血液中的杀菌物质。以生物制品公司生产的半成品：‘血液增菌肉汤’ 为培养基。 配制步骤 (1)、称量、(2)、溶解、(3)、矫正PH、(4)、分装、(5)、灭菌、(6)、质验、(7)、保存 标本的采取 使用抗菌药物前，发热时 血液标本与所选用的血液增菌培养基的比例以1：10为宜 血液标本和骨髓标本由临床无菌操作抽取一定数量的血液或骨髓注入事先准备好的血液培养瓶中， 写好标记后送细菌室 血液标本出现阳性结果的报告　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　三级报告制度 当疑有细菌生长时，以无菌操作挑取培养液涂片，作革兰氏染色，如发现细菌要马上电话报告临床(描述镜下细菌形态和革兰氏染色情况)，这是第一级；取培养液转种血平板、中国蓝平板，同时按涂片所见细菌的类型选药直接做初级药敏。24h报初级药敏结果给临床，这是第二级；同时挑取培养基上长出的可疑菌落做正规的生化试验和药敏。48h根据生化结果发正规报告，同时报告药敏，这是第三级。 具体实验操作 1.取标本分区画线接种到血平板、SS平板上 假设各位同学的平板经过培养24小时 2.取提供的平板菌落进行G染色观察细菌形态 3.取平板菌落进行触酶试验 4.取平板菌落接种于胆汁七叶苷培养基、6.5% NaCl肉汤培养基 5. 各人放入指定托盘后，由值日生放入35℃培养24小时。 具体实验操作 1、取出标本分离培养的血平板、SS平板观察平板上的菌落形态、颜色 2、观察胆汁七叶苷培养基、6.5%NaCl肉汤培养基生长及颜色变化 3、综合分析，报告出鉴定结果 实验报告 1、实验名称 2、实验目的 3、实验材料 4、实验操作 （1）标本接种 （2）细菌鉴定：菌落形态、细菌形态． （3）主要生化：胆汁七叶苷、 6.5%NaCl 5、报告：培养出＊＊＊＊＊＊＊ 6、结果分析及注意事项 * * 血液标本 清析 混浊 无菌生长 (7天培养) 血平板、中国兰 脓液、尿液等标本 直接涂片 初步报告 鉴定程序 药敏 1 2 3 菌落特点 生化反应 药物敏感 菌体形态 第一天的主要操作： 第二天的主要操作：