拟南芥中一个与ANK6互作的蛋白功能的初步研究Preliminary Study on the Function of a Protein Interacting with ANK6 in Arabidopsis thaliana.pdfVIP

分类号—— 密级—— 学校代码 !Q5垒2 学号 2QQ墨!垒Q2QQ窆鱼 拟南芥中一个与ANK6互作的蛋白功能的初 步研究 StudiesontheFunctionofan Preliminary Proteinin ANK6—·interacting Arabidopsis 指导教师姓名、职称 奎盔屋数拯塞盘邀拯 湖南师范大学学位评定委员会办公室 201 1年4月 摘 要 ANK6(ank删nrepeatprotein6)属于锚蛋白家族，包含三个ANK 重复模体，作为接头蛋白介导蛋白与蛋白之间的相互作用。实验室 的研究已发现，在拟南芥中，ANK6通过与转录因子SIG5相互作用 调控雌雄配子的识别从而影响了拟南芥的双受精的完成。筛选和鉴 定线粒体中与ANK6相互作用的其他蛋白，对于阐明ANK6在精卵 识别调控过程中的作用机制，具有重要的理论意义。应用酵母双杂、 BiFC等生化、细胞学技术以及遗传学研究手段，对一个与ANK6互 作的“新基因的功能进行了初步的研究，结果如下： 应用酵母双杂交的方法，以ANK6为“诱饵”筛选拟南芥的cDNA 文库，获得与之相互作用的候选蛋白--Atl916870。序列比对等生物 信息学分析显示该蛋白与人的hDAP3蛋白同源，命名为AtDAP3， 在拟南芥中是一个单基因蛋白。mAP3参与细胞线粒体内蛋白的合 成，以及调控细胞程序性死亡，而AtDAP3的功能未知。 为了鉴定ANK6与AtDAP3的相互作用，利用酵母双杂交及 BiFC(双分子荧光互补)的方法，从体外和体内两个方面对其互作关 系进行了检验，证实二者可以相互作用。 通过GFP标签法构建转基因植株，应用激光共聚焦及线粒体特 与AtDAP3的BiFC结果也显示它们在拟南芥叶肉细胞原生质体的一 种点状细胞器中相互作用。这些结果表明在AtDAP3定位在细胞的线 I 互作用提供位点上的可能性。 利用GUS报告基因研究AtDAP3启动子的活性，构建转基因植株， 发现该基因在植物的幼嫩组织如根尖、茎尖等部位强烈表达。又通 过构建不同长度的启动子片段，找到核心启动子序列，通过软件分 析发现其中包含了许多参与组织发育的特定顺势元件以及一些环境 胁迫元件。 构建AtDAP3过表达转基因植物，发现在甘露醇、高盐、ABA处 理下，过表达拟南芥种子萌发要比野生型的早，且后期生长也较野 生型快。 总之，我们的研究表明AtDAP3与ANK6在拟南芥细胞线粒体内 相互作用。这些研究结果为以后更深入的研究AtDAP3的功能提供了 有价值的参考。 关键词：ANK6，AtDAP3，蛋白相互作用 Ⅱ and thatintercatwithANK6inthemitochondriaforthe identifyproteins ofANK6’Sfunctioninthedouble understanding fertilization．byusing andother approaches，an yeasttwo-hybrid，BiFCcytological，orgenetics in identifedand Arabidops，AtDAP3，WaS ANK6一interactingpro