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基因组学 恢复LD-CMS育性的编码线粒体GRP蛋白恢复基因Rf2 摘要 细胞质雄性不育（CMS）是与导致不能产生有功能的可育花粉的线粒体突变有关。一般在核恢复基因Rf存在时CMS育性便得到恢复。在籼稻Lead Rice 中发现LD-CMS（Lead Rice-CMS），单一的核基因Rf2可使其育性得到恢复，对Rf2基因进行了定位克隆，证明： 亚细胞定位发现Rf2表达蛋白的作用靶位点为线粒体。 Rf2产生的mRNA存在于发育和成熟的花药中。 表达152个核苷酸组成的蛋白。此蛋白有富含甘氨酸区域。而有别于以前恢复基因表达PPR蛋白。对恢复机理新认识。 与rf2基因相比，有一个有效的碱基替代。在蛋白质中表现为第78号氨基酸上苏氨酸被异亮氨酸代替而使其有恢复功能。 Rf2定位于2号染色体短臂上。 前言 BT-CWS:Rf1a和Rf1b，定位在10号染色体 WA-CWS:Rf3和Rf4,分别定位在1和10号染色体 HL-CWS:Rf5和Rf6(t),定位在10号染色体 CW-CWS：Rf17,定位在4号染色体 第一号染色体 G. Zhang et al 前言 BT-CWS:Rf1a和Rf1b，定位在10号染色体 WA-CWS:Rf3和Rf4,分别定位在1和10号染色体 HL-CWS:Rf5和Rf6(t),定位在10号染色体 CW-CWS：Rf17,定位在4号染色体 Rf1a和Rf1b，表达PPR蛋白，有与RNA作用部位，通过对不育基因产生的mRNA作用，而使育性恢复。 关于非PPR蛋白恢复育性的研究较少,Rf17，表达一个不是PPR的未知蛋白。 同时，在矮牵牛和萝卜中发现的Rf基因也表达PPR蛋白。 第一个关于Rf2基因报道，是在玉米中，其表达类似动物醛脱氢酶。 研究新Rf基因作用，对更深入了解育性恢复机理有重要作用。 材料 LD-CMS： 有Lead Rice细胞质而有粳稻Akihikari(rf)细胞核遗传背景。 有Lead Rice细胞质而有粳稻Taichung 65(rf)细胞核遗传背景。 LD-Akihikari ： LD-Taichung 65 ： Lead Rice Akihikari Lead Rice Taichung65 LD-Akihikari CSSL204 × F1 F2 F3 连锁分析 Rf2杂合体 定位于2号染色体 有籼稻Kasalath品种（Rf2）第2号染色体片段而拥有粳稻Koshihikari品种遗传背景的染色体片段代换系 CSSL204和CSSL205： 结果 Rf2基因的分子基因定位 Rf2基因的克隆 Rf2基因的结构 表达分析 Rf2基因的亚细胞定位 Rf2基因的分子基因定位 LD-Akihikari Kasakath × LD-Akihikari CSSL205 × LD-Akihikari CSSL204 × F1可育 F1不可育 定位在CSSL204含有的2号染色体的短片段的上 Kasakath CSSL204 CSSL205 第二号染色体 2号染色体 用88个F2和1500个F3群体进行精细定位 定位于CAPS42-1和SNP1之间 Rf2基因的克隆 CAPS42-1和SNP1之间为34kb，对比日本晴基因组，预测在这区段有四个基因： LOC_Os02g17350.1 LOC_Os02g17360.1 LOC_Os02g17370.1 LOC_Os02g17380.1 翻译一个有VPS27, Hrs and STAM (VHS) and GGA and Tom1 (GAT)蛋白 翻译一个含有两个PPR重复的蛋白 翻译一个未知蛋白 翻译一个GRP蛋白 分析Kasakath和日本晴编码区序列表明： LOC_Os02g17350.1 LOC_Os02g17360.1 LOC_Os02g17370.1 LOC_Os02g17380.1，表达含有GRP区域的152个氨基酸蛋白的基因，在SNP分析中表明在Kasakath中一个氨基酸，苏氨酸（ACT）被异亮氨酸(ATT)。 一致。 同时，通过RT-PCR分析表明，在T65,LD-Akihikari 和F2群体中，四个基因在花药中都表达，表明不育系的恢复不是由于Rf2基因是否表达决定的，即：可以忽略在启动子区域有替代。 分别把四个基因通过双载体转入LD-Akihikari和T65中， 结实两个植株，K7-113和K7-145。结实率分别为13.4%和54.8%。花粉萌发率分别是49.2%和52.4%。 花粉萌发： 转入K7片段的LD-T65 转入K1片段的LD-T65 LD-T65 萌发 不萌发 表明：K7片段即LOC_Os02g17380.1是有功能的Rf2基因 2号染色体 花药萌发 花粉染色 K7-145可育