丝状真菌组织DNA的提取.pdfVIP

维普资讯 生物技术 9(6)：38—41，1999 Bioteehrmlc~ 丝状真菌组织 DNA 的提取 韩利刚 袁 毅 王 罡 第二军医大学南京军医学院席原学教研室。南京 ．210099) (解敛军墩牧大学裹学系 ，长謇 ．130062) 用CrAB法直接从熊收真茵的新鲜茵篮中提取 DNA，井将所提取 DNA进行随 机 引糟多态性扩增 (RAPD)，得到 了较清晰的扩增 图谱 ，证 明谊法为提取真茵 DNA 以用于分子生物学研 究的一种有效方法。 关键词 ：DNA提取 ，丝状真茼，褂 D 法站 见诸呈要报道 C种r提AB取 1 1材料与方法 ， 如 法及氯化苄法等…。 各种方 法因所提 DNA 的用途 不同而各异 ， 1．1 材料 但基本原理一样。由于 D】A分子量较太 ， 1．1．1 供试菌种 ：共2属 8种 l1个菌株 ，其 结构复杂，提取过程易降癣、变性 ，我们在参 中lO种来 自中国医学科学院皮肤病研究所 考前人工作基础上建立 了一种适合丝状真菌 (ID)，1种 由本室分离培养。详见表 1。 DNA提取的较为简便 、易行、可靠的方法。 裹 】 RAPD研究供试一种 ／ 洼：D 为中国压学科学院皮肤霸研究所 1．1．2 主要 试 剂 ：2×CTAB缓 冲液t2％ 7M NaC[；CrAB沉淀缓冲液 ：1％CRAB(w／ CTAB(w／w)+100mM Tris(pH8．0)+1．4M +50mM Tris(pH 8．0)+10mM EDTA NaCI5％CTAB溶液 ：5％CTAB(w／w)+0． (pH8．0)；高盐 TE缓冲液 ；10mM Tris(pH 8．0)+lmMEDTA(pH8．0)+1M NaCl；1× TE缓 冲液 ；10mM T出 (口H 8．0)+lmM 收稿 日期 ：1999—02—10．惨回日期 }1999—0B一07 EDrA(a!ll8．0)；95％乙醇；80％乙醇 ；氯仿 ／ 异戊醇混合液：24：1(v／v)(4℃贮存)；液氟； 维普资讯 生物技术 9(6)：38～41，1999 Bioteckdogy 引物，购 白上海细胞所癌基 因研 究室；Taq 30s。如溶液 其呈微弱的云雾状 或溶液依 旧 酶 ，购 白中国科学院遗传所 。 很清 ，刚产量低 ，需离心 1—5rain。弃去上清 1．1．3 主要仪器 ：日本 MDEL7930型高速 液。将片状l沉淀在高盐 TE缓 冲液 中溶解 。 冷冻离心机；．rD236型 PCR仪；电泳仪c 加入 20 xTE缓冲液溶解小 的片状沉 淀， 1．2 方法 50ul溶解 中等片状沉淀 ，100gl溶解 大的片 1．2．1 样 品处理 ：将 供试菌种接 种于 PDA 状沉淀。65℃水潜 5rain，用手轻弹以溶解片 平板，置 25℃恒温籍 中培养约 4周。用无菌