人干扰素_huIFN_的高效表达_纯化及生物学活性.pdfVIP

第 20 卷 　第 2 期 病　　毒　　学　　报 Vol. 20 　　No. 2 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2 0 0 4 年 6 月 CHINESE JOURNAL OF VIROLO GY J une 　2 0 0 4 ω ω 人干扰素 ( huIFN ) 的高效表达、纯化及生物学活性 张成海 ,李武平 ,衣作安 ,王刚 , 吕宏亮,段招军 ,侯云德 ( 中国疾病预防控制中心 　病毒病预防控制所 　病毒基因工程国家重点实验室 北京 ,10052) ω( ω) 摘要 :为了获得人干扰素 huIFN 在大肠杆菌中的高效表达 ,根据大肠杆菌的偏爱密码子 ,人工设计并合成了 ω α huIFN 高表达基因 ,并克隆到原核表达载体pBV220 ,在大肠杆菌 DH5 中实现了高效表达 , 目的蛋白占细胞总蛋 白的 15 %左右 , 以包涵体形式存在。表达产物经变性、复性及阳离子和分子筛层析纯化,纯度达 90 %以上,产物的 8 ω 抗病毒活性约为 1. 0 ×10 IU/ mg ,并具有体外促 N K 杀伤活性。此结果为进一步研究和开发重组 huIFN 奠定了 基础。 关键词 :干扰素 ;表达 ;包涵体 ;纯化 ;抗病毒 ( ) 中图分类号:R978. 7 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 8721 2004 02 - 0124 - 04 ( ) ω 　　干扰素 IFN 是一类具有抗病毒、抗肿瘤、免疫 知的原因 ,原始的 干扰素基因在原核系统中的表 α 调节作用的重要的细胞因子 , 由于其具有十分重要 达水平很低 ,在同等条件下 ,其表达水平要比 干扰 的临床治疗作用而被广泛研究[1 ] 。干扰素分为 Ⅰ 素低几个数量级。本室的黎孟枫博士等曾在大肠杆 ω αβω τ ω 菌系统对人 干扰素的基因进行了克隆和表达 ,但 型和 Ⅱ型 , Ⅰ型包括 、、、干扰素。 干扰素发 [3 ] ω 现于 1985 年 , 由病毒诱导的外周血白细胞和淋巴细 其表达效率较低 。在本研究中 ,对 干扰素基因 胞产生 , 其活性约占病毒诱导的外周血单核细胞 进行了改造 ,使用了大肠杆菌的偏爱密码子 ,并重构 ω ( ) 了基因的5′端 ,实现了 干扰素在大肠杆菌中的高 PBMC 产生的干扰素的总活性的 15 %～30 %左 ω 表达 ,并经过变性、复性和纯化等一系列步骤 ,获得 右。自然 干扰素是一种糖蛋白 , 分子量约