转金属硫蛋白Mtallothionein基因微藻的研讨.pdfVIP

IIoLhi i one 转金属硫蛋白(MLa n)基因微藻的研究 茹炳根， 曾文炉 (蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室，北京大学生命科学学院，北京100871) 1．微藻及其特性 微藻，不是分类学上的名称，而是指那些介于微生物和植物之间、能进行放氧光合作用的藻类类群。 微藻细胞具有如下生物学特性： a)个体微小(10um-100Ilm)，分布广泛； b)多以分裂方式繁殖，生命周期较短；适应能力强，光合自养成本低．易于实现大规模培养和生产 过程的自动化；细胞结构简单，可在指数生长期有效吸纳外源DNA，部分种类还具有天然的转化和重组系 统，利于外源基因的转入和表达。此外，一些微藻如原绿球藻和聚球藻已完成基因组测序，遗传背景清楚， 是理想的转基因模式微藻。微藻细胞具有广泛的用途(如图l所示)，除可应用于食品、医药和精细化工 等领域外，藻细胞还可在在积累自身生物量的同时，通过生物转化或吸附作用，去除废水中的有机物、放 射性核素和重金属等，因此具有重要的环保价值． 微藻净化重金属废水其机理主要是藻体细胞中生物大分子对金属的物理吸附以及细胞对金属的生物 转化。即籍藻体细胞表面生物大分子对金属的物理吸附或微藻细胞自身的主动运输，通过离子转移系统将 重金属离子运送到细胞内部，从而将无机重金属离子转化为有机化合物，这不仅使重金属离子的毒性大大 降低，而且有机形式的重金属化合物(如Se、Cr、Ge和Zn的多糖或蛋白质络合物)还具有某些特定的医 疗保健功效。 微藻净化重金属废水的优点：操作条件(pH、温度等)比较温和，作用范围较宽：’适宜于处理金属离 子浓度比较低的废水溶液；不产生二次污染；利用简单的固液两相分离技术即可使废水溶液中的重金属离 子得以去除，金属的洗脱和回收易于实现，从而有助于后续处理工艺的简化：资金投入少、净化体系易于 建立和放大。但微藻净化重金属废水同样存在着一些缺点，主要表现在：对重金属选择性较差；吸附容量 小，对重金属耐受性差；净化效率易受制约，如微藻细胞种类、微藻自身的生理活动状况、环境条件(pH、 温度)等。为了克服上述缺陷，进一步发挥微藻细胞在重金属废水净化中的效能，有许多办法和技术可供 借鉴，如通过诱导，筛选对金属离子吸收能力强的藻株；控制环境条件：固定化微藻细胞，提高对重金属 最为有效的方法之一。 2．_T及其特性及转MT基因微藻的构建 物肝脏盯的分子量约为6500道尔顿，有61个氨基酸组成，其中半胱氨酸就占整个分子的30％以上。这些 半胱氨酸通过其巯基(-SH)能与金属原子以强的化学配位键结合。MT分子在天然状态下具有n和p两个结 构域，分子量约各占分子的1／2。N一端为D结构域，可结合3个金属原子：C一端为OL结构域，可结合4个金 ·7。 属原子。不同的结构域对金属的结台具有一定的倾向性．即瞄构域更易结合z千’、cu”和Mn。，而n结构域 更易结台除此之外的其它请多重金属。 匿1微藻细胞的用途 图2 金屠硫蛋白的典型结构 北京大学生命科学院蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室通过10多年来的研究和探索，利用 蛋白质工程和基因工程技术，已先后构建丁诸多MT突变体。研究发现。与天然盯相比，d．a—a．‰具 为将上述天然MT或诸多突变体转入微藻细胞，我们筛选了多种转化方法．其中电击转化法和三亲接台转 移法取得了令人满意的结果。之后，又构建了诸多适于微藻的高效表达质粒，如pKGC，pTZ，pDc一，pKT一， PCC7002， 7120，Synechococcussp pKSB和pKG等。所采用的微藻体系也多种多样，如舶船洲口PCC sDPCC6803和SynechococcusPCC Skwechocystis