实验三普通光学显微镜的构造与使用.docVIP

显微镜的使用和微生物鉴定一、实脸目的 了解普通生物显微镜的构造、使用、维护方法。二、基本原理 微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜（1610×）、高倍物镜（440-45×）和油镜（l8 mm，95-100×）三种。油镜常在镜筒外标有白圈，它是三者中放大倍数最大的。 使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率与玻璃基本相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。 图1 接物镜和标本之间不同折射率时的光线通路（A：空气，B ：香柏油） 显微镜的分类：目前，显微镜根据结构和原理不同主要分为光学显微镜和电子显微镜，它们中又分成几种类型。光学显微镜有明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、偏光显微镜和立体显微镜等。明视野显微镜普通生物显微镜 暗视野显微镜可以观察比较透明的活的微生物，省去染色等步骤，能比较清楚的观察微生物的形态。相差显微镜我们利用透明物体不能改变波长和振幅，但能改变相位的特性，相差显微镜把光线分解成直射光和衍射光，使之相互干涉，即能区分明暗，观察到物体。荧光显微镜一一主要用于微生物内部结构的观察。一般通过荧光染色剂使特殊结构在特殊光源下发光，以便观察。倒置显微镜主要用于观察需要进一步生长的活的微生物或动植物细胞。电子显微镜利用光线波长的变化，主要用于观察微生物内部的结构。三实验器材1．仪器普通生物显微镜2．材料标本片香柏油、二甲苯、擦镜纸。四操作步骤和内容1．普通生物显微镜的一般构造都可分为光学系统和机械系统两大部分 机械部分镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推进器、粗调（10m圈）、微调（0/圈）光学部分反光镜、聚光镜、光圈、物镜（）、目镜（5、10、16），较好的显微镜还有光源。2．显微镜的放大倍数与分辨率这是显微镜的两个重要参数。放大倍数目镜倍数物镜倍数 分辨率R resolution)——指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与物镜的数值孔径NA成正比，与入射光的波长入成反比显微镜的分辨率是用可分辨的最小距离D来表示的。 式中是光波波长；NA是数值孔径，指光线投射到物镜时，入射光线与折射光线之间的最大夹角（称为镜口角）的一半正弦乘上玻片与物镜间介质的折射率所得的乘积，如右图3，可用下列公式表示： n＝介质折射率；＝最大入射角，即镜口角。 图 物镜的光线入射角．物镜前透镜2．载玻片．入射 因此，光线投射到物镜的角度越大，显微镜的效能就越大，该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。利用油镜不但能增加照明度，更主要能增加数值孔径，提高显微镜的分辨率。 图4 物镜的主要参数 3．显微镜的使用方法 取镜 使用时应特别小心。从镜箱中取出时，一手握镜臂，一手托镜座，放在实验台上。做好必要的清洁和调整工作。 调节光源 a．将低倍物镜旋到镜筒下方，旋转粗调螺旋，使镜头和载物台距离约为0.cm左右。b．上升聚光器，使之与载物台表面相距lmm左右。 c．左眼看目镜调节反光镜镜面角度 低倍镜观察 低倍物镜（810×）视野面广，焦点深度较深，为易于发现目标确定检查位置，故应先用低倍镜观察为宜。 操作步骤： a．先将标本玻片置于载物台上（注意标本朝上），并将标本部位处于物镜的正下方、转动粗调螺旋，上升载物台使物镜距标本约0. cm处。 b．左眼看目镜，同方向慢慢旋转粗调节螺旋使载物台缓慢上升，至视野内出现物象后，仔细调节焦距和照明，直至视野内获得清晰的物象，及时确定需进一 c．移动推动器。将所要观察的部位置于视野中心，准备换高倍镜观察。高倍镜观察将高倍物镜（40）转至镜筒下方（在转换物镜时，要从侧面注视。以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞），调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细反复转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，再移动推动器选择最满意的镜检部位将染色标本移至视野中央，待油镜观察。油镜观察 a．调螺旋提起镜筒，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。方向慢慢转动粗调螺旋，上升载物台，并及时从侧面注视使油浸物镜浸入油中，直到几乎与标本接触时为止（注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头）。 ．左眼看目镜，右微微转动粗调螺旋，下降载物台（注意：此时只准下降载物台，不能向上调动），当视野的标本物象时，改用微调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。 c．如果向上转动粗调螺旋使镜头离开油滴又尚未发现标本时，可重新按上述步骤操作直到看清物象为止。d．观察完毕，下降载物台，取下标本片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。切忌用手或其他纸擦镜头，以免损坏镜头，可用绸布擦净显微镜的