三维荧光光谱法测定蛇床子素在离体皮肤中不同深度的分布研究.pdfVIP

三维荧光光谱法测定蛇床子素在离体皮肤中不同深度的分布 1 2 3 1 苑振亭 雍克岚 陈大为 李志强 1.解放军第230 医院 辽宁 丹东 118000 2.上海大学生命科学 院 上海 200000 3.沈阳药科大学 辽宁 沈阳110016 摘要 目的 运用三维荧光光谱分析新技术能提供丰富的光谱信息的特点 研究了蛇床子素在不同皮层的分布趋势 方 法 将经蛇床子素贴剂渗透后的皮肤进行水平恒冷切片 将切片平铺在石英玻璃上用三维荧光光谱仪测定其荧光强度 结果 以发射波长为x 轴 激发波长为y 轴 荧光强度为z 轴 构成了三维荧光光谱图 从角质层开始皮肤切片的荧光 强度依次减弱 结论 利用三维荧光光谱和指纹图谱可有效地检定出皮肤中分布的蛇床子素 并可以初步判断出蛇床子 素在皮肤中的量化分布趋势 关键词 蛇床子素 三维荧光光谱 中图分类号 R94 文献表示码 A 文章编号 三维荧光光谱法是近 20 年来发展起来的荧光分析新技术[1,2] 这种技术能够获得激发波长 发射波长或其它变量 同时变化时的荧光信息 主要应用于石油 煤炭等领域的分析工作 我们采用三维荧光光谱法测定了蛇床子素在皮肤 不同深度的分布情况 获得了较满意的效果 现介绍如下 1 仪器与试剂 蛇床子素贴剂 实验室制备 蛇床子素对照品 中国药品生物制品检定所 人离体皮肤 乳癌全切后剥离皮肤 低温恒冷切片机 OTF 型 英国 帕金爱尔默公司生产的荧光光谱仪 型号为LS55 狭缝宽度 激发 发射 5nm 扫描速度为360nm.min-1 石英玻璃 锦州新世纪石英玻璃有限公司定制 1cm 5cm 2 实验方法 将皮肤角质层用滤纸吸干 把蛇床子素贴剂紧紧贴在皮肤的角质层一侧 然后用Franz 扩散池将皮肤夹紧 真皮 层面向接受室 接受液为生理盐水 恒温水浴温度为 32 在持续搅拌下 分别扩散2h 后取下皮肤用脱脂棉蘸蒸馏 水将给药部位皮肤表面擦净 然后用滤纸将皮肤表面吸干 迅速将给药部位的皮肤冷冻处理 尽量使皮肤平整 然 2 后进行恒冷切片 厚度为每片5m 面积为0.6c 1 cm 弃取前2 次切片 取第3 6 表皮层 12 14 真皮层 次切片 将切片平铺在石英玻璃 避光处晾干 然后将载有皮肤的石英玻璃置荧光光谱仪测定三维荧光图谱 同法制 备空白皮肤切片和阳性皮肤切片 用无水乙醇制成每 1L 含蛇床子素50ng 的溶液 滴加2L 在空白皮肤切片上 晾 干 进行对照 由计算机收集的总扫描数据 以发射波长为x 轴 激发波长为y 轴 荧光强度 IF 为z 轴 构成三 维荧光谱图 3 结果 不同深度皮肤切片的三维荧光图谱结果见表 1 图1 2 3 4 5 6 Tab1 The data of three dimensional fluorescence spectra of osthol in the skin 表 1 皮肤中蛇床子素三维荧光光谱测定结果 Blank Positive Depth Sample control control 3th 6th 12th 14th IF 0.148 295.99 405.69 303.72 216.85 201.15 作者简介 苑振亭 男 理学博士 主任药师 Tel 0415 6960230 E-mail yztpharm@163.com Fig1 Three dimensional fluorescence spectra of blank control 图1 空白对照三维荧光谱图 Fig.2 Three dimensional fluorescence spectra of positive control 图2 阳性对照三维荧光谱图