mHCN1通道孔隙多肽溶液构象的核磁共振研究.pdfVIP

维普资讯 生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ACTABIOCHIMICAetBIOPHYSICASINICA2003，35(1)：59—63 mHCN1通道孔 隙多肽溶液构 象的核磁共振研究 眭 涛 俞汉钢 胡红雨 施燕红 宋国强 (中国科学院上海生命科学研究院药物研究所 ，上海 200031； NewYorkCollegeofOsteopathicMedicineof NewYorkInstituteofTechnology； 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 ，上海 200031) 摘要 通过分析在 50％D3一TFE+50％H2O溶液中采集的WET—TOCSY、WET—NOESY等二维核磁共振波谱 ，确 定了mHCN1通道孔隙多肽氨基酸残基的自旋系统 ；通过解析 NOESY谱 中的NOE相关点 ，完成 了对其序列以及 主链和侧链质子的全部归属。利用 NOE信息进行 了结构计算 ，得到其三维结构。三维结构显示 mHCN1通道孔隙 多肽中存在一段 螺旋。其核磁共振研究结果为更深入研究选择性离子通道的机制提供了良好的基础。 关键词 mHCN1通道孔隙多肽 ；核磁共振；溶液构象 离子通道是一种特殊的膜蛋 白，通过穿越质膜 道功能与其通道孔隙多肽结构有多大的关联?这些 以形成不同离子进 出细胞的通道 ，在确立细胞 电性 都是我们十分感兴趣 的问题 。鉴于通道孔隙部分多 质如静止膜 电位 、激发性等方面起关键作用。离子 肽在离子通道中的重要地位 ，有必要搞清楚 HCN 选择性是电压 门控离子通道 的独特性质 ，即不同的 离子通道孔隙部分多肽 的溶液构象。HCN离子通 离子通道控制不同的离子进 出 。例如Na 通道只 道家 族 有 4个 成 员：HCNI、HCN2、HCN3和 允许 Na 通过 ，K 通道只允许 K 通过 ，Ca¨通道 HCN4，它们的氨基酸序列很相似 。核磁共振是一 也只允许 Cah通过 。电压 门控 K 通道有 6个可透 种模拟在生理条件下研究分子溶液构象 的有力手 性膜域 (sl～S6)，在 s5和S6之间存有一个允许离 段，但在研究大蛋 白质分子量上受到限制 。mHCNI 子通过的通道孔隙，此通道约20个氨基酸长短，嵌 通道孔隙多肽 由 l9个氨基酸所组成 (YALFKAM- 入膜中 2j。考虑到膜的疏水环境 ，通道孔隙一般存 SHMLCIGYGAQA)，它处于mHCNI(910个氨基酸 在 仅螺旋结构 ，其中的氨基酸序列特殊结构形成离 所组成)序列中的335～353位，并处于可透性膜域 子选择性过滤器。对 K 通道的研究表明其通道孔 S5和 S6之间以形成通道孔隙。本文 以其为研究模 隙部分多肽存在特征性序列——GYG3，该序列对 式进行溶液构象的核磁共振研究。 于 K 的选择性通过有重要作用。一般来说 ，GYG 序列的存在不允许其他离子 (如 Na )通过 。由 l 材料和方法 (MaterialsandMethods) mHCN (amouseversionofHyperpolarization-activated 1．1 mHCN1孔 隙多肽 的制备 CyclicNucleotide．sensitive)基因表达 的起搏离子通 mHCNI孔 隙 多肽 片段 (YALFKAMSHMLCI- 道 (pacemakerchannels)与 K 通道有相似之处，它 GYGAQA)通过固相合成方法合成 。经 C18反相柱 ， 的通道孔隙部分也具有 K 通道 的结构特征性序列 并采用乙腈／水线性梯度洗脱的方法纯化 。 GYG，但 HCN离子通道却允许 Na 通过 ，且’K 与 1．2 圆二色性测定 Na通过率之 比约为3：1或4：1Ls]