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* * 第20章 病毒感染的检测与防治原则 p. 227 第一节 病毒感染的检测 virological diagnosis 一、标本的采取、送检与处理 基本与细菌同，只是标本可加“双抗”处理 另外就是低温送检；血清最好是早晚期双份 二、病毒的分离培养与鉴定 一）病毒的分离培养：需提供活细胞 提供活细胞的三种方式: （一）动物接种（animal inoculation） （二）鸡胚培养 （embryonated eggs） 绒毛尿囊膜接种 尿囊腔接种 羊膜腔接种 卵黄囊接种 （三）细胞培养（tissue culture） # 原代和次代细胞培养 # 二倍体细胞株 # 传代细胞系 大多由癌细胞或二倍体细胞突变而成。 如HEP-2、HeLa和KB细胞。 病毒在细胞内增殖的检测指标 * 细胞变化：CPE、包涵体(inclusion body)形成、 红细胞吸附等 细胞病变 (Cytopathic effect, CPE) 正常细胞 病变细胞 病毒在细胞内增殖的指标 细胞团缩、裂解、肿胀、变圆 细胞融合或聚集成葡萄串样等 组织培养瓶与pH变化 * 细胞代谢的改变: * 细胞代谢的改变: pH值 * 干扰现象： * 免疫荧光法检测 二）病毒数量与感染性的测定 * 空斑测定：PFU 感染性病毒量：以 PFU/ml表示 * TCID50或 ID50的测定： * 红细胞凝集实验： * MOI测定： 三）新分离病毒的鉴定 1、核酸类型的测定 2、理化性状的检测 3、形态学观察 4、血清学鉴定 5、基因测序和生物对比（sequencing and blast）: 这是最特异和重要的方法 三、病毒感染的血清学诊断 1、中和试验（neutralization test） 2、补体结合试验（complement fixation test） 3、血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test） 4、凝胶免疫扩散试验 四、病毒感染的快速诊断 1. 形态学检查：EM 或IEM，≥107/ml 2. 病毒蛋白抗原检查：IF，RIA，EIA 3. 特异性IgM抗体的检查： 4. 检测病毒核酸：PCR或LCR *