第8章微生物的遗传突变异.ppt

（五）基因突变及其机制 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis)的芽孢和伴孢晶体变得小而少、生长速度缓慢，产孢子越来越少； 细黄链霉菌（Streptomycesmicroflavus)“5406”在平板培养基上菌苔变薄、生长缓慢，不再产生典型而丰富的桔红色分生孢子层，有时甚至只长些浅黄绿色的基内菌丝；代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下降； 赤霉素生产菌种藤仓赤霉（Gibberellafujikuroi）产赤霉素能力的下降； 枯草杆菌（Bacillus subtilis）“B.F.7658”生产α-淀粉酶能力的衰退； 白僵菌（Beauveriabassiana)对宿主致病能力的下降 菌种退化是发生在细胞群体中一个由量变到质变的逐渐演化过程。 首先，在细胞群体中出现个别发生负变的菌株，这时如不及时发现并采取有效的措施，而一味地移种传代，则群体中这种负变个体的比例逐渐增大，最后占据了优势，整个群体发生严重的退化。 所以，开始时，所谓“纯”的菌株，实际上其中已包含着一定程度的不纯因素。 2. 菌种退化的原因 （1）基因突变 控制生产性状的基因发生负突变。 遗传性变异是绝对的，它的稳定性是相对的； 退化性变异是大量存在的，而进化性变异则是个别的。 （2）分离现象 遗传育种获得的菌种若是多核，或是单核但DNA双链之一发生突变，随着传代，其生产性状也将发生退化。 这种退化不是基因突变引起的，而是由于诱变获得的高产株本身不纯。高产突变只发生在一个核和一条DNA单链上，随着细胞分裂，核发生分离，突变基因和未突变基因发生分离，出现了突变的高产菌株和未突变的低产菌株。 退化是菌种自发突变的结果，培养环境营养不良、发酵时间过长而积累有害产物都会加快菌种退化 3. 菌种退化的防止 （1）从菌种选育时考虑 在育种过程中，应尽可能使用孢子或单核菌株，避免对多核细胞进行处理，采用较高剂量使单链突变的同时，另一条单链丧失了模板作用，可以减少出现分离回复现象。 同时，在诱变处理后应进行充分的后培养及分离纯化，以保证获得菌株的“纯度”。 （2）从菌种保藏角度考虑 微生物都存在着自发突变，而突变都是在繁殖过程中发生或表现出来的，减少传代次数就能减少自发突变和菌种退化的可能性。 （3）从菌种培养角度考虑 培养条件要有利于生产菌株，不利于退化菌株的生长。如控制碳源、氮源、pH和温度，避免出现对生产菌不利的环境，限制退化菌株在数量上的增加。 （4）从菌种管理的角度考虑 最有效的方法是定期使菌种复壮(rejuvenation)。菌种复壮：在菌种发生退化后，通过纯种分离和性能测定，从退化的群体中，找出尚未退化的个体，以达到恢复该菌种原有性状的一种措施。 广义的复壮：在菌种尚未退化之前，定期地进行纯种分离和性能测定，以使菌种的生产性能保持稳定。是一项积极的措施。 二、菌种的保藏 菌种保藏的目的：保证菌种经过较长时间后仍然保持着生活力，不被其它杂菌污染，形态特征和生理性状应尽可能不变异，以便今后长期使用。 基本原理：选用优良的纯种，最好是休眠体（分生孢子、芽孢等），创造一个使微生物代谢不活泼，生长繁殖受抑制，难以突变的环境条件。 环境要素：干燥、低温、缺氧、缺营养以及添加保护剂。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡。 1. 定期移植保藏法 将菌种接种于适宜的斜面或液体培养基，也可进行穿刺培养，待生长成健壮的菌体（对数期细胞、有性孢子或无性孢子）后，将菌种放置4℃冰箱保藏，每间隔一定时间需重新移植培养一次。 移种时间：芽孢杆菌3~6个月一次。其它细菌每月一次。如保藏温度高，则间隔的时间要短； 放线菌4~6℃保藏，每3个月移种一次； 酵母菌在4~6℃保藏，每4~6个月移种一次。某些种类酵母。如芽裂酵母、阿氏假囊酵母、棉病囊霉等，必须每1~2月移种一次； 丝状真菌在4~6℃保藏，每4月移种一次；担子菌4~6℃保藏，每3月移种一次。 优点：最早使用，普遍采用。在实验室和工厂中，即便同时采用几种方法保藏同一菌种，这种方法仍是必不可少的。该法简单易行，代价小，能随时观察保藏菌株是否死亡、变异、退化或染菌。 缺点：保藏过程中微生物仍然有活动，所以，保藏的时间较短，菌种容易退化。采用橡皮塞代替棉塞，可以避免水分散发并且能隔氧，能适当延长保藏期。 2. 液体石蜡保藏法 在斜面表面覆盖一层无菌的液体石蜡，液面高出培养基1厘米，将其置试管架上以直立状态低温保藏 优点：液体石蜡可以防止水分蒸发、隔绝氧气，延长保藏时间。 缺点：必须直立放在冰箱内，占据较大的空间。 3. 沙管保藏法、土壤保藏法 沙土管：取河沙过24目筛，用10~20%的盐酸浸泡除去有机质，洗涤，烘干，分装入安瓿管，加塞灭菌。需要保藏的