大肠杆菌Ee株SLTⅡeB与FedF基因在大肠杆菌中融合表达及抗血清的中和特性研究.pdf

中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 活菌直接计数法。但可能是由于我们掌握的环丙沙星的浓度还不够准确以至于杀死了细菌， 也可能是一些其它的原因，这种方法并没有很好的测出活菌的存在。这种方法能不能很有效 的观察到活的乳酸杆菌，有待于进一步研究。 图2 vBNc状态的乳酸杆菌第3天的荧光显微镜照片 固3 vBNc状态的乳酸杆菌第30天的荧光显微镜照片 本实验结果表明，含有乳酸杆菌的动物微生态制剂的最佳保存温度为4℃，因为在这个 温度下，乳酸杆菌不易死亡，并且可以进入VBNC状态，乳酸杆菌得以很好的保存下来。 当ⅦNC状态下的乳酸杆菌进入人的肠道，就会在这个适宜的环境下得到良好的复苏，这 也为我们以后的研究方向奠定了一定的基础。 参考文献暗 融合表达＼及抗血清的中和特性 列团平1t是斌1．棒艺远‘。胡长敏1，郭爱珍。，金梅林1。陈焕春” 【华中农业大学农业微生袖学田家重点实验室武汉430070长江走学动物科学学院荆州434025) 搐要根据猪水肿病大肋杆菌Ec株主要免疫原性片段su：IIcB和FedF的基因序列，利用PcR技术克 隆目的片段，并将sLl：IIcB和FcdF基因依序串联于谷胱甘肤一S一转移酶(Gsn表达系统的GsT下游， 的生物擘活性．以纯化的融合蛋白为抗原免疫新西兰兔制备血清．体外活性试验表明，所制备的抗血清能 基金项目：国家863计划资助项目(2006AAlnA206)及国家科技攻关计划资助项目 作者简介：刘国平(197扣X男，湖北武汉人，讲师，博士．工作单位：长江大学动物科学学院，主要从事致病 性大肠杆菌病荤学及其基因工程疫苗研究．E．mail：hhaaiiecrr@163．∞m +通讯作者：吴斌jrcl：027F飘：027罐7281795；E—m丑i1：舢b@扫嘶j．h聊．酣u．∞ 1117 其他论文 中和Ee株水肿毒素对vefo细胞的痛变效应；黏附抑制试验证实抗血清能抑制Ec株对猪小肠刷状缘细胞 的黏附．研竞表明GST·SF融夸蛋白具有SLT：IIeB夏FedF的中和表位． 关建词Ec株；sLT二IIeB；FedF；融合表达；中和特性 猪水肿病由特定血清型产SLT．IIc大肠杆菌引起，现已成为危害规模化养猪业的重要疾 病之一l-J。猪水肿病的致病机理，分为三个阶段，即致猪水肿病大肠杆菌SUTC感染易感 猪后，细菌以其F18ab(F107)菌毛粘附于小肠上皮细胞，造成小肠上皮细胞的损害，引起 仔猪腹泻，同时在肠道内定居和增殖的细菌产生志贺样毒素II型变具体(SLBIk)并被吸收， 导致感染猪出现水肿和神经症状。F18ab菌毛与类志贺毒素II型变异体(sLT．IIe)是致仔猪 水肿病产Ve∞细胞毒素大肠杆菌(SLTEc)的两个主要毒力因子【2J。 传统的仔猪水肿病疫苗的研制，只是以致水肿病大肠杆菌菌株的O抗原为基础，并没 有考虑水肿毒素SLnlIe和菌毛F18ab，其免疫保护率不高，对猪水肿病至今还没有较为有 效的疫苗。 在猪水肿病大肠杆菌的免疫原性片段中，SLT．IIe由1个分子质量为33ku的A亚基和5 个分子质量为7．6ku的B亚基共同组成的聚合体。B亚单位作为免疫原诱导的中和抗体可抑 制其与受体的结合，从而抑制A亚单位进入细胞发挥细胞毒作用。从另一方面，FedF抗血清 能抑制F180．cD疗对小肠上皮细胞的黏附。近年来有些学者用提纯的F18ab的菌毛免疫鸡， 制备针对F18ab菌毛的卵黄抗体．在体外能抑制F18菌株对猪肠道黏膜上皮细胞的吸附，口 服免疫则可对攻毒提供保护；以SD【-2e抗毒素被动免疫和用其类毒索主动免疫后攻毒，取 得了令人满意的免疫效果。鉴于A呲i—sLT-IIeB及Anti．FedF的抗黏附作用，因此。我们利用分 子克隆技术，将su．IIeB及FedF构建融合基因sF，利用谷胱甘肽．s．转移酶(GsD表达系统 将融合基因sF串联于GsT下游进行原核表达，并对重组蛋白的生物学活性，免疫原性、免疫 血清中和特性进行了研究。 l材料与方法 1．1菌株、质粒与阳性血清 猪水肿病大肠杆菌鄂E株(Ec：0139．F18+SuEC)，由本实验室分离鉴定和保存；对 血清均为本实验室保存。 1．2酶及主要试剂