大肠杆菌F1菌毛表达条件的初探研究.pdf

1999年全国兽医微生物学学术年会论文集 .115 · Sn,,t2、6I2 大肠杆菌F1菌毛表达条件的初探 陈 雷 成大美 徐建生 李俊宝 $ 雄 扬州大学畜牧兽医学院动物医学系 扬州 2250(,P 搁 要 F1菌胜在体外表达受到许9回素的影响 改良Minca 为了对菌F1毛的进一步研究，本试脸以只产Fl菌 注:微量盐见Minca培养基的配方- 毛的菌株C600为对象，从培荞基、沿度,pH,通氧等 1.2 万 法 条件进行了摸索，实验结果表明:培养条件的限制板 12.{ 用C600菌侏分别接种以上所示各种培养 为显著，在MD一1肉汤(pH6.8-7.2)中,37C,静 基.第481与第 72h各检查一次，每隔 18h传代一 止培养 18h可使Fl菌毛获得较好表达;通入氧气将 次，共传代二次。 有利于Fl菌毛约表达 1.2.2 将培荞物用生理盐水制成 30亿菌/毫升浓 关键词 Fl菌毛 表达条件 _ “- 度 (ClD,,2.07)，与3%豚鼠红细胞作血凝实验，同时 与D-甘露糖作血凝抑制实验，以检测PI菌毛的表 禽源致病性大肠杆菌Fl菌毛是禽大肠杆菌病 达效果、。 的一种重要的致病因子，为一种蛋白质纤丝，具有良 1.2.3 同时在电子显微镜上观察，以验证菌毛的表 好的免疫原性。具有Fl菌毛的大肠杆菌可以钻附于 达效甲 真菌、植物和动物细胞。当其钻附于红细胞表面时即 1.2.4 选取 1.2.2.卜血凝滴度最高的培养基在 可引起血凝反应，这种豁附特性叮以被D甘露糖所 43C、41C、39C、37C、35C、33C.22C、20C、 抑制，其抑制作用是高度特异性的。Briton等首光阐 isC,16Ch静青培养的表达效T. 述了大肠杆菌Fl菌毛的表达具有相变性 1、‘这种可 1.2.5 选取 1.2.4中而凝滴度最高的培养温度为 逆的菌毛化和非菌毛化相变是自发的，其发生率约 标准，分别在pH6.4,pH6.6,pH6.8,pH7.0,pH7.2, 为每代细胞的1Y,一。.1Y. 这种相变的调节受到 pH7.4,pH7.6,pH7.8,pH8.0,pH8.2条件 卜静置培 个 “相变开关’，的控制 此外，Fl菌毛的体外表达还 养48h观察不同酸减度时Fl菌毛的表达效果。 受到多种因素的影响 ，‘，，有关F1菌毛在体外表达条 1.2.6 以I.2.5中Fl菌E表达最好时的PH值 ’ 件的报道尚少，其满意的表达条件还有待于进 一步 为标准 在以 卜几步中最佳温度，最佳酸减度的条件 摸索 本试验对影响Fl菌毛表达的部分因素进行r 卜静置培养C600菌株，刀缓慢通入氧气培养48h, 初步摸索 结合Fl菌毛与豚鼠红细胞的血凝特异性 用MRHA,MSHA检测Fl菌毛的表达效果 及D一甘露精对Fl菌毛有特异性的血凝抑制作用， 1.2.7 挑垠 20个 (600菌株的单个菌落分别接种 检测了Fl菌毛在体外的表达情况.从而获得r表达 MD-1肉汤，在本次试验中最佳条件下培养48h, Fl菌毛的满意培养条件，这将为F1菌毛的深入研 48h后连续传代3次 观察不同菌落的F1菌毛表达 究提供借鉴 的隋况 1 材料与方法 2 结果 1.1 利料 2.1 山表 1所示，液体培养基中，C600菌侏在MD 1.1.1 大肠杆菌C600菌株(只表达Fl菌毛，山中 一I肉汤(pH7.0)中F1菌毛表达效果最好,48h即 国科学院上海植物土理研究所的洪孟明教授提供) 可达到51.g2的血凝滴度，连续传代三次后可稳定在 1.1.2 液休培养某 TSB.TSB+微量盐.LB,MD 7--8l