大肠杆菌粘附素faeG基因在乳酸乳球菌表面表达的研讨.pdfVIP

大肠杆菌粘附素faeG基因 在乳酸乳球菌表面表达的研究 指导老师 途王焦 盟究虽．一 单位地址。 逝、江!!巫菹太堂 申请学位类别 理堂亟±专业 动物堂 论文提交时间 论文答辩时间 学位授予单位和日期 答辩委员会主席 论文评阅人—— 1111111111II I]1111111111111 IIIl llIill Y1804345 大肠杆菌粘附素万aeG基因在乳酸乳球菌表面表达的研究 摘要 随着人们生活水平的提高和食品安全意识的增强，使用益生菌来生产畜禽用口服 AsSafe， 疫苗倍受人们关注。其中，乳酸菌是公认的安全级(GenerallyReoognized GRAS)益生茵，具有天然抗菌、抗病毒和抗肿瘤的作用，用它作为口服疫苗生产的 载体不仅安全，且具有益生作用，能提高动物健康水平，促进动物生长，改善饲料报 Escherichia 酬，降低生产成本。FaeG是产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigeniecoli,ETEC) K88菌毛的主要粘附亚基，是导致断奶仔猪腹泻(Post-weaningdiarrhea，PWD)的重 为抗原基因，以化脓链球菌M6蛋白的最后140个氨基酸为细胞壁锚定序列(CWAM6)， 进行基因工程菌创制。将faeO和 诱导，使角PG在NZ9000的细胞壁表面表达，为开发预防PWD的口服益生菌疫苗做 前期探索。 SG-S)序列。 引物引入印村酶切位点，下游引物引入印“酶切位点和柔性肽(G…G bp，包含相应的酶切 将PCR产物克隆到pMDl8．T载体上，测序结果显示该序列813 应的氨基酸由Glu变为Val，683位的g变为c，该突变是一个无义突变，整个序列的 读码框没有改变，表明本实验克隆到了加G基因。从碱基和氨基酸同源性比较看， 分析表明该蛋白亲水和疏水部分比例相近。抗原性分析表明抗原表位所占比列约为 50％，主要分布在相应的疏水区域。 一对PCR引物，在上游引物引入印g，酶切位点和柔性肽序列(G·G-S—G·s)碱基， 进行序列对比，该序列第33位的a突变为g，此处为设计引物时引入的一个无义突变， 位有细胞壁锚定分拣信号LPSTG，表明本实验克隆到了M6蛋白的细胞壁锚定序列 (cwa．6)。二级结构分析显示该氨基酸序列中甜螺旋占60．7％，为主要二级结构域。 电荷分布预测显示这段氨基酸序列带有大量电荷，前114个氨基酸呈现正负电荷交替 分布，后面一段主要是正电荷。疏水性分析显示该序列主要由亲水氨基酸残基组成， 只有115．134位为疏水残基。 3．通过酶切连接的方法来分级构建力PG细胞壁锚定表达质粒。首先将 测到了FaeG蛋白。 ．角eG．oWaM6表达载体，并检测到扣eG进行了表达，加eG．CWCIM6进行了转录。 关键词：乳酸乳球菌；faeG基因；细胞壁锚定序列；产肠毒素大肠杆菌 II ADHESIONEXPRESSED RESEARCHONE．coli GENEfaeO OFL．1actis THESURFACE oN ABSTRACT