人胎盘间充质干细胞大鼠体内移植的初步免疫学研究[Word文档].docVIP

人胎盘间充质干细胞大鼠体内移植的初步免疫学研究 本文档格式为WORD,感谢你的阅读。 最新最全的 学术论文 期刊文献 年终总结 年终报告 工作总结 个人总结 述职报告 实习报告 单位总结 演讲稿 人胎盘间充质干细胞大鼠体内移植的初步免疫学研究 　　在众多种类的间充质干细胞中，尤其以胎盘来源的间充质干细胞优点突出，以下是一篇探究人胎盘间充质干细胞大鼠体内移植的，供大家阅读查看。 　[摘要] 目的 了解大鼠对于人胎盘间充质干细胞是否存在天然免疫耐受，分析人胎盘间充质干细胞在大鼠体内出现免疫排斥的可能。 方法 分离提取并鉴定人胎盘间充质干细胞，观察大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后有无出现相关的免疫排斥症状、细胞在大鼠体内的分布情况及脏器的病理改变。 结果 大鼠尾静脉移植人胎盘间充质干细胞后未出现急慢性免疫排斥反应，肝、肾、肺可见标记后的人胎盘间充质干细胞的分布，但相关病理切片未见明显的淋巴细胞浸润和纤维组织增生现象。 结论 人胎盘间充质干细胞与大鼠脏器间存在天然的免疫耐受。 　　[关键词] 胎盘; 间充质干细胞;免疫排斥 　　近年来，由于间充质干细胞的研究(Mesenchymal stem cells，MSCs)逐步深入，人们对间充质干细胞移植治疗大面积骨缺损[1-2]、神经系统损伤[3]、卵巢早衰[4]等疾病产生了浓厚的兴趣，而在种类众多的间充质干细胞中，人胎盘来源的间充质干细胞被认为是免疫原性最低的干细胞之一[5-6]，也是目前研究的热点之一，学者们多通过大鼠移植人胎盘间充质干细胞来进行相关疾病的研究[7-10]。然而，对于人胎盘间充质干细胞是否在人鼠间中存在天然的免疫耐受，尚无相关的动物实验基础。因此，为了了解人胎盘间充质干细胞移植对大鼠各脏器功能的影响，客观的分析人胎盘间充质干细胞在大鼠体内出现免疫排斥的可能，避免由于免疫的因素掩盖或降低甚至误导了研究因素的作用，我们对正常大鼠卵巢尾静脉注射移植人胎盘间充质干细胞做了一个初步的研究。 　　1 材料与方法 　　1.1主要试剂 　　DMEM-F12培养基(hyclone)、胰酶(hyclone)、胎牛血清(hyclone)、CO2培养箱(日本三洋)、流式细胞仪(FACSCALIBUR)，PKH26试剂盒(sigma)(089K0781)。 　　1.2 方法 　　取足月剖宫产分娩的健康胎儿的胎盘，在无菌条件下剪取小块蜕膜侧胎盘组织，进行人胎盘间充质干细胞的原代培养。取第2代的胎盘间充质干细胞，胰酶消化后制成单细胞悬液，采用流式细胞仪进行胎盘间充质干细胞免疫表型分析。PKH26标记胎盘间充质干细胞，按sigma公司的说明书进行操作。实验分两组，每组10只大鼠，为wista近交系大鼠，体重180～200 g。第一组为对照组，不做任何处理;第二组为尾静脉注射组。移植成功后观察在大鼠体内的分布状况和大鼠一般情况的观察，评估PKH26标记的胎盘间充质干细胞在大鼠体内移植的安全性和可行性。 　　2 结果 　　2.1胎盘间充质干细胞的形态观察及生长情况 　　分离出的胎盘间充质干细胞贴壁生长，细胞呈长梭形，类似于成纤维细胞样，见胞浆突起，胞浆丰富，核大，呈平行排列或旋涡状生长，细胞增殖活跃，约3～4 d 即可铺满全层，可稳定传代。见图1。 　　2.2 胎盘间充质干细胞免疫表型分析 　　取第2代细胞进行流式细胞仪检测，结果发现胎盘间充质干细胞表达 CD29，CD44，CD73，CD90、CD105;不表达CD14，CD34(造血干细胞抗原)，CD45(白细胞共同抗原)、CD106、CD133和HLA-DR(MHC-II)，提示所得贴壁细胞为人间充质干细胞， 表达间充质细胞特异性抗原标志而不表达造血干细胞、内皮细胞特异性抗原。见图2。 　　2.3 胎盘间充质干细胞标记结果 　　细胞标记后染料在细胞膜上分布均匀一致，在倒置荧光显微镜下呈红色荧光，细胞轮廓清晰。标记百分率为100%。台盼蓝染色细胞的存活率为99%。见图3。 　　2.4 大鼠移植胎盘间充质干细胞情况 　　移植组大鼠进食、活动、大小便均与对照组无异，未发现大鼠出现嗜睡、呕吐、抽搐、猝死、无尿、精神状态异常及偏瘫等有关器官栓塞的症状，亦未发现大鼠出现呼吸困难、出血、脱毛、血尿、血便等急慢性免疫排斥反应。 　　2.5大鼠体内的胎盘间充质干细胞的分布 　　荧光显微镜下可见PKH26标记后呈红色荧光的胎盘间充质干细胞，均匀分布在肺脏、肝脏及肾脏皮质。肝脏组织可见均匀分布红色荧光，整个肝脏结构组织清晰可见，包括肝脏的胆管和肝脏大血管均可见;在肾脏中亦可见红色荧光细胞主要分布在肾脏皮质，部分肾小体轮廓清晰可见。见图4。 　　2.6 大鼠相关脏器的病理切片 　　移植组大鼠肝、肾、大脑、膀胱HE染色后未见明显淋巴细胞浸润和组织结构的破坏