多重PCR快速检测鉴别牛布鲁氏菌和牛分枝杆菌的研究与应用研究.pdfVIP

第六届理事会第二次会议囊教学专业委员会2006年会议论文集 2．6敏感性试验 将培养液经细菌计数，制备DNA模板进行l0倍倍比稀释，分别取各个稀释度的稀释液 lul做模板进行PCR扩增，经电泳结果分析，最小检出量可达103cfu／ml，·详细结果见图3。 3小结与讨论 3．1经综合诊断，可以确诊引起牛死亡的病原体均是A型产气荚膜梭菌。 3．2产气荚膜梭菌是一种非常重要的人畜共患病原微生物，在自然界分布很广，常见于 土壤，水源，饲料，圈舍，肠道内，在饲养环境和饲料突然改变等诱因下，就可以引起动物 突然发病死亡，如牛、羊肠毒血症，坏死性肠炎，猝击症等。给养殖业带来巨大经济损失， 越来越受到人们的重视。 3．3长期以来主要采用传统的实验室方法和动物毒素中和实验来鉴别产气荚膜梭菌的血 清型，操作起来比较繁琐，而且有诸多不定的影响因素，容易造成实验误差。为提高产气荚 膜梭菌的鉴定与分型准确率，缩短诊断时间，近年来许多学者【7．8】开始考虑用分子生物学方 法直接检测产气荚膜梭菌的肠毒素基因，克服常规方法的局限性。本试验采用的PCR方法 则可对直接检测毒素的基因，从而不依赖于该菌是否产生了肠毒素。结果表明PCR诊断方 法快速。准确，能很好的代替常规方法，提高了检测的准确率和敏感性，加强了时效性，取 得了良好的诊断效果，为疾病的快速诊断，流行病学研究提供了科学依据，为建立多重PCR 分型诊断方法奠定了基础。 参考文献略 多重PCR快速检测鉴别牛布鲁氏菌 和牛分枝杆菌的研究与应用 谢芝勋1，谢志勤1，刘加波1，庞耀珊1，邓显文1，唐小飞1，温娟2 (1．广西兽医研究所，广西南宁530001；2．南宁市兽医站，广西南宁530001) 3S 摘要：根据牛布鲁氏茵具有种特异性的BCSP-31K基因和结核分枝杆茵复合物2rRNA，设计并合成了 两对分别扩增各自序列的引物，建立了多重PcR快速检测鉴别以上两种病原体的方法，其扩增片段分别为 31 lbp和938bp．特异性试验结果表明，该方法对所有供试的布鲁氏菌及结核分枝杆菌都能扩增出阳性目的 片段，而对照茸株则不能扩增出任何条带，敏感性试验结果表明，该方法能检测到10pg各自的DIqA模板． 对3批共24头牛布鲁氏茵血清凝集试验阳性(10头)或阴性(14头)牛的牛奶样品和来自7个不同牛场 经结核变态反应为阳性或可疑牛的鼻粘液样品46份、牛奶样品2份，阴性牛的牛奶样品8份进行PCR检测， 结果牛布鲁氏茵阳性的牛奶样品10份，阴性的牛奶样品14份．牛分枝杆菌阳性的鼻粘液样品39份，牛奶 样品2份，阴性的牛奶样品8份． 关键词：多重PCR；牛布鲁氏茵；牛分枝杆茵。 ． 牛布鲁氏菌病和结核分枝杆菌病都是人、畜共患的传染病，对人类健康和畜牧业的发展 造成了严重的危害。Marston[1J等1859年首次报道布鲁氏菌病以来，现今所知布鲁氏菌有六个 种属睇3J。牛布鲁氏菌是布鲁氏菌中的一种，牛布鲁氏菌病一般是由流产布鲁氏菌(Brucella abortus)引起的，临床表现为流产，随子宫排泄物和乳汁排出病原菌。结核病是由结核分枝 杆菌引起。结核分枝杆菌主要分为人型、牛型、禽型和非洲型，牛型分枝杆菌可以感染人，． 结核病牛是人类结核病的重要传染源，世界每年有300万人死于该病【4l。 高度敏感和特异性的检测方法是预防和控制这两种传染病的主要手段，目前对牛布鲁氏 菌病和牛结核病的诊断手段主要是包括病原分离鉴定、酶联免疫法(ELISA)151、迟发性过 71、PCR方法【E’9H 敏反应IoJ、Y干扰素分析I 0‘11’1如13J等，传统方法分离鉴定病原条件要求苛 刻，且费力、费时、危险性高、成功率低[81。PCR方法是这些方法中特异性最强、敏感性最 高的病原检测手段，在欧美的一些发达国家已经把PCR作为布鲁氏菌病病原诊断的一种工 具【l引。多重PCR是一种特殊PCR形式，可快速检测鉴别多种病原体，在临床多种病原体混 ．．565．