家兔尿生成的因素及肾缺血再灌注损伤初探.doc

家兔尿生成的因素及肾缺血再灌注损伤初探 (南方医科大学第二临床学院10级临床医学) 摘要： 目的方法关键词: 家兔，体重约2.2kg，由南方医科大学提供。 1.2 方法：（进行21组实验，每组均按下述方法进行） 1.2.1 前期准备 家兔称重2.2kg，用20%乌拉坦11ml(5ml/kg)耳缘静脉麻醉，麻醉后将家兔仰卧位固定于手术台。家兔颈部、左肾区、耻骨联合上部分别备皮。沿甲状软骨下正中依次剪开皮肤、浅筋膜，钝性分离右侧颈外静脉并插管。沿胸锁乳头肌和胸骨舌骨肌间隙钝性分离，并在气管正中钝性分离颈阔肌，游离左颈动脉并插入肝素充盈的动脉插管，连接压力换能器以记录平均动脉压ABP。家兔耻骨下联合上约三横指处沿前正中线（腹白线）剪开皮肤、浅筋膜，于膀胱左侧输尿管并进行输尿管插管并用有刻度的试管收集尿液。 1.2.2 研究尿生成过程影响因素 静脉推注37℃，30ml生理盐水，用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量（ml/分钟）；一段时间后静脉输入37℃，10ml 20%葡萄糖溶液，用有刻度的试管收集尿液并计算注射后每分钟尿量。收集的尿液待测尿肌酐含量。 1.2.3 肾缺血再灌注损伤的实验 于左肾区切开皮肤、浅筋膜，找出左肾并游离左肾动脉，用动脉夹夹闭，夹闭15min后观测平均动脉压和尿量变化。松开动脉夹，再灌注，再次观测平均动脉压和尿量变化。15min后，1~7组采取抢救方案一（于颈静脉插管输入37℃、20ml 生理盐水），8~14组采取抢救方案二（于颈静脉插管输入37℃、19ml 生理盐水及速尿1ml），14~21组采取抢救方案三（于颈静脉插管输入37℃、10ml 生理盐水及20%葡萄糖溶液10ml）分别进行抢救，抢救15min后取尿测定尿肌酐浓度，记录平均动脉压和尿量变化并收集尿液待测尿肌酐含量。 1.2.4尿肌酐测定方法 取尿液10μl与2ml蒸馏水按1：200比例稀释，按下表分别加入样品及不同试剂于各管，37℃ 10min水浴，以蒸馏水调零， 测510 nm处分光光度值并按以下公式计算尿肌酐。 尿肌酐(mmol/L) = （测定管OD - 空白管OD）/ （标准管OD – 空白管OD ）x标准品浓度（10umol/L） x 201倍 表1 尿肌酐测定加样量表 试管 标准管 测定管 调零管 空白管 稀释后尿液（ml） 0 1.6 0 0 试剂一(Cr标准品)（ml） 1.6 0 0 0 蒸馏水（ml） 0 0 2.6 1.6 试剂三（ml） 0.5 0.5 0 0.5 试剂四（ml） 0.5 0.5 0 0.5 内生肌酐清除率Ccr =尿肌酐浓度/血肌酐浓度x 尿量(ml/min) 2 实验结果 2.1标准管及空白管OD值见下表： 表2 标准管及空白管OD值 标准管OD 空白管OD 1 0.075 0.012 2 0.069 0.008 平均值 0.072 0.01 2.2 各治疗方案实验数据如下（以各组实验数据中有效数据记录，其中尿肌酐、血肌酐及内生肌酐清除率为计算值）： 正常状态下，家兔平均动脉压75~85mmHG，尿量3~4.5ml，血肌酐156.1~163.2umol/L，尿肌酐6224~9369umol/L，Ccr 11.6~17ml/min。输入生理盐水后各项指标均上升但不明显，输入葡萄糖后尿量增加，但平均动脉压变化不明显，再灌注后除血肌酐升高外，各指标均明显降低。方案一治疗家兔后平均动脉压91mmHG，尿量7.6ml，尿肌酐1458.9 umol/L，血肌酐161.5 umol/L，Ccr 4.6，方案二治疗后家兔平均动脉压83.4mmHG，尿量22.5ml，尿肌酐1231.9umol/L，血肌酐177.4umol/L，Ccr 13.4，方案三治疗后家兔平均动脉压72.7mmHG，尿量13.5ml，尿肌酐2042.4umol/L，血肌酐143.7umol/L，Ccr 12.8（各时间点各指标变化规律详见讨论部分）。 表3 治疗方案一各实验数据 输尿管插管后 输生理盐水后 输入20%葡萄糖后 再灌注15min后 抢救方案一15min后 平均动脉压（mmHG） 76.7 76 70 81 91 尿量（ml） 4.5 5 6.8 1.2 7.6 尿肌酐（OD值） 0.202 0.051 0.055 血肌酐（OD值） 0.098 0.109 0.101 尿肌酐（umol/L） 6224.5 1329.2 1458.9 血肌酐（umol/L） 156.1 175.6 161.5 内生肌酐清除率(ml/min) 12.0 0．6 4.6 表4 治疗方案二各实验数据 输尿管插管后 输生理盐水后 输入20%葡萄糖后 再灌注15min后 抢救方案二15mi