生物制药专业实验课件（吉林大学）重组人胸腺肽a1在大肠杆菌中的表达.docVIP

项目名称 重组人胸腺肽a1在大肠杆菌中的表达 经 费 5000（元） 起止时间 2012年 12 月至 2013 年 6月 负责人 学号 姓名 年级 专业 联系电话 E-mail 孙亚厅 10级 生物制药 一、立项背景和依据（包括研究目的、国内外研究现状分析、研究意义，应附主要参考文献） （一）研究,负责T 细胞的分化和成熟,其功能的正常与否和机体的健康密切相关。在胚胎期间,胸腺是第一个出现的淋巴器官,初生时期胸腺约重10 -15 g ,是一生中胸腺相对重量最大的时期, 随着年龄的增长胸腺增大,至青春期为30 -40 g ,此后,胸腺随年龄老化而逐渐退化萎缩和脂肪化,其功能也随之逐渐减退,到老年时,胸腺仅重15 g 左右。胸腺的免疫功能在抗感染，抗肿瘤和自身免疫性疾病中起着重要作用, 这就不难理解,为什么随着年龄老化, 肿瘤的免疫性疾病和其它疾病的发病率逐渐增高,所以,研究腺尤其是它所分泌的胸腺肤,对了解某些疾病的发病机理及其治疗极为重要。 胸腺肽al 是20 世纪70 年代后期Goldstein 等人发现的胸腺提取物第5 组份( TF5) 中的一种成份,是一种针对T 细胞的免疫增强剂，成年人胸腺开始退化, 推测胸腺肽al在体内的合成也开始急剧减少, 其临床用途广泛: 对乙肝、丙肝、恶性肿瘤、重型病毒性肝炎、流行性乙型脑炎的治疗效果明显, 并且副作用少, 此外胸腺肽al 在心血管疾病和男性不育的治疗中也有显著的作用。 从动物胸腺组织中提取胸腺肽, 其原料来源有限, 纯化步骤复杂, 而且Ta1 在提取的胸腺肽中含量极低, 仅为0.56% -1.0%。目前临床上所用的Ta1制剂均为化学合成制备, 但是采用化学合成的方法成本较高, 且合成的杂质较多,不易纯化,还会造成环境污染。 应用基因工程的方法,将含有人胸腺肽的重组基因导入微生物体内，通过发酵进行获得胸腺肽a1。利用基因工程和发酵工程相配合，并通过改善技术条件和培养方式进而获得高产量高效能的胸腺肽。将其应用于临床，解决胸腺肽的不足问题，进而解决人们因为年龄增长伴随的免疫力下降的问题。具有重大的临床意义。 国内外研究现状分析al是一个由28 个氨基酸组成的酸性多肽,等电点4.2,分子量3108 kD。人胸腺肽al是一种生物反应调节因子, 它可以特异地诱导T 细胞Lyt1+、2+ 、3+ 表面标志的产生, 促使T 细胞的成熟和分化, 并可刺激成熟的T 细胞、NK 细胞分泌白介素-2 、α-干扰素、γ-干扰素等淋巴因子, 同时也促进IL-2 受体的生成。 胸腺肽a1 是一种高度保守的活性肤, 广泛分布于哺乳动物的各个组织器官中, 其蛋白结构均相同。用间接免疫荧光抗体技术证明, 在人胸腺中胸腺肽a1 专一地定位于囊下皮质和髓质上皮细胞中, 再深处皮质中则无, 髓质中胸腺肽a1阳性上皮细胞数随年龄增长而下降。据放射免疫学(R I A ) 测定, 在胸腺提取物中Ta l 免疫活性水平在十岁以前较高, 十岁至二十岁间逐渐下降, 在胸腺内区, 尤其是髓质上皮细胞中, 胸腺肽a1活性细胞的绝对数目随年龄增长而下降, 四十岁以后不能检测到胸腺肽a1了。胸腺肽a1 的生理功能十分广泛, 其生物学活性表现在: 胸腺肽a1作用于胸腺细胞成熟的早期和晚期, 增加T 细胞表面Thy-1,2 和Lyt-1,2,3 的表达,促进T H 细胞成熟。胸腺肽a1还可在体外调节胸腺细胞的末端脱氧核昔酸转移酶(TDT) 水平, 体内刺激巨噬细胞抑制因子(MIF)、干扰素(IFN)、白细胞介素一2 (IL一2) 及其受体的表达。胸腺肽a1还能增强人体N K 细胞活性, 调节机体免疫功能, 促进细胞因子及其受体表达, 增强免疫细胞活性, 从多方面发挥其抗病毒效应。根据放射免疫学测定, 血清中非正常的胸腺肽a1水平与某些疾病有关, 有一些报道表明人胸腺肽al低水平导致胸腺依赖的免疫缺陷疾病。同时, 胸腺肽a1与神经内分泌间的相互作用也非常引人注目, 研究者发现在下丘脑和垂体提取物中存在高浓度人胸腺肽al, 胸腺肽a1 能在下丘脑和/或垂体水平影响ACTH、Prl、TSH 和L H 分泌, 表明它可能是一种神经内分泌调节剂。胸腺肽a1 作为一种生物反应调节剂, 可明显提高机体的免疫功能。近年来已广泛作为免疫增强剂用于临床治疗各种免疫缺陷病、自身免疫病、肿瘤及病毒等微生物感染。而当其与其他生物反应调节剂, 如IL-2 , IFN -a , 胸腺因子等协同作用时疗效更好, 特别是用于治疗慢性病毒性肝炎,效果更为显著。此外, 还有其它潜在的临床应用前景。 正如上文提到的那样，胸腺肽a1 作为一种免疫调节剂, 目前在免疫调节失调和免疫受抑制的疾病, 如慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、癌症等的治