兰花组织培养及分子生物学.ppt

兰花组织培养及分子生物学研 究 进 展 学 生： 朱 丽 花 指导老师：韦 军 陶 俊 一、兰 花 组 织 培 养 研 究 进 展 2 基因组方面的研究 　近几年从兰花的不同组织中获得了许多基因和基因相关片段。 利用同源探针的方法,花色素的主要色素之一查尔酮的全长cDNA得到了其基因克隆,其中有3个克隆OCHS3、 OCHS4、 OCHS8的序列已被测定,研究表明,所有cDNA克隆都含有1个1185bp的开放阅读框。 很多学者对兰花花期的核酸变化进行了大量研究,并成功地得到了许多基因和基因片段。Yu等提取了石斛兰花期和营养期的茎尖分生组织中的总RNA,利用RNA差异显示的方法,发现在营养阶段有53个差异表达的cDNA克隆,而在花期有16个专化性表达的cDNA片段,在转录的基础上,进行Northern blot分析,证实12种cDNA是减少的,而8种cDNA是增加的,且序列分析表明有5个克隆是转录因子。 Yu等从兰花转化期茎尖分生组织(TSAMS)得到gene7(otg7)并用其为探针,从TSAMS的cDNA文库中分离出了3个MADS box基因(DOMADS 1、 DOMADS 2 、 DOMADS 3)。研究还表明, DOMADS 基因在兰花的花期起着重要作用。Bui和Ho等在蝴蝶兰中克隆到了1-氨环丙基-1-羧酯合成酶基因(Phal ACS1、 Phal ACS2、 Phal ACS3),这几个基因主要是在兰花不同的时期调节乙烯的合成,为兰花花期的改造提供了遗传学依据。 Pellegrino等从广泛分布于地中海地区的一种兰花的文库中得到微卫星位点并对18个位点进行引物设计,筛选到了6个位点的引物,发现这6个位点的等位基因数量为3～6个,杂合率在0 .35～0 .86之间变化,表现出较高的变异水平;Gustafsson等在某兰花的两个基因组文库中发现了6个多态性微卫星位点,且呈较高水平变异。在兰花叶绿体基因组研究中,发现了1个衔接重复子(即小卫星位点),该重复单元是1个在叶绿体tRNA基因内区上16bp的富含AT的序列,且序列大小在不同地区来源的同种兰花中存在差异,可能作为分子标记用于群体遗传研究。 2 .2　基因的改造　 通过与根癌农杆菌协同培养法,将外源DNA插入到兰花基因组中,能引起幼苗变异。如Yu等将含有DOH1基因土壤杆菌LBA4404接种到原球茎的薄切片上并进行共同培养, DOH1基因能在组培苗中表达,形成了不正常的多态茎植株,表明DOH1基因调节兰花植株的形态,这将为利用基因工程技术来修饰兰花形态打下基础。 3　展 望 随着兰花产业的发展,利用组培技术培育无毒兰,将是今后兰花组培的另一个发展方向。目前人们对兰花共生菌的研究进展缓慢。为了提高兰花种子的萌发率,深入研究兰花共生菌根及应用将是今后的一个重要研究课题。 更值得一提的是,根癌农杆菌成功地导入到了兰花的基因组中,这将大大推动兰花分子生物学研究。在分子生物学和组织培养研究的基础上,开展兰花的多条途径的综合育种,尤其是开展种间属间杂交结合染色体加倍而形成的异源四倍体具有十分诱人的利用前景。 谢 * * 植物学专题讨论二 兰花是整个兰科植物的总称,全世界约有730多属,21500多种,广泛分布于全球各地,但主 要分布在热带、亚热带地区。我国约有173余属,1240余种,在南北各地均有分布,但以云南、台湾、海南最为丰富。 缺 点： 繁殖系数低 速度慢 传统的繁殖方式： 分株繁殖 市场需求 兰花组织培养三个关键期： 原球茎的诱导 原球茎的继代培养（根状茎） 壮苗的培养 外界条件 来源：除茎尖、叶片和种子外,花瓣、萼片、子房、花梗、侧芽、花芽、茎段、根尖等外植体也成为兰花组织培养中原球茎的重要来源。 1.　原球茎的来源及增殖 根：认为可能性小 Stewart等用树兰等的根开创性地培养出了原球茎和从愈伤组织分化出1株苗； 徐宏英等用大花蕙兰的幼根成功地进行组织培养,来检测其快速繁殖的影响因素。 茎尖：最早应用,侧芽应用也相当广泛。 缺点：一些单茎性兰花,可能丧失母株,如利蝴 蝶兰、仙指甲兰等; 适用: 复茎性兰花,如大花蕙兰、卡特丽亚兰、石斛兰、文心兰等; 一般认为带1～2个叶原基的茎圆锥成活率高,中间部位侧芽的成活率及生长率较高。