固态菌种生产技术操作规程.doc

固态菌种生产技术操作规程 菌种是食用菌生产的基础，只有优良的菌种才可能有好的收成。菌种一般分为母种、原种或栽培种3级。无论制作哪一级菌种，关键应强调无菌观念，严格按照无菌技术要求进行操作。固态菌种生产技术操作规程如下： 1 范围 本标准规定了食用菌菌种的定义、操作规程、菌种质量标准以及标志、贮存、运输。本标准适用于各种食用菌母种、原种、栽培种。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。 GB/T 12728-91 食用菌术语 DB33.B39.063-90 食、药用菌菌种质量标准 3 定义 3.1 母种（一级菌种，俗称试管菌种） 由孢子、子实体组织、耳木或基质菌丝分离纯化，并在琼脂培养基上繁殖的菌种。 3.2 原种（二级菌种） 由母种移植到固体培养基繁殖的菌种。 3.3 栽培种（三级菌种，俗称生产种） 由原种移植扩大的菌种。 3.4 培养基 培养物生长所需营养物质的液体或固体混合物。 3.5 移植 将菌种从一种基物移接到另外的培养物中扩大培养的过程。 3.6 接种 将菌种移植在培养基物中的方法。 3.7 无菌 不含活杂菌体的状态。 4 菌种操作规程 4.1 母种操作规程 母种的制作大致经过以下几个过程：培养基配制→培养基灭菌→子实体分离或耳木分离或孢子分离→培养→转管纯化培养→母种。 4.1.1 培养基制作 根据不同食用菌的不同营养需要配制不同的培养基。常用的配方有： ①土豆葡萄糖琼脂培养基(简称PDA培养基) 土豆(即马铃薯)200克、葡萄糖20克、琼脂(凝固剂)20克。 ②土豆蔗糖琼脂培养基(PSA培养基) 土豆200克、琼脂20克、蔗糖20克、水1000毫升。 ③土豆胡萝卜琼脂培养基(PCA培养基) 土豆20克、胡萝卜25克、琼脂20克、水1000毫升。 ④土豆琼脂培养基(PA培养基) 土豆250—300克、琼脂20克、水1000毫升。 4.1.2 容器 试管，试管应保持清洁、干燥、无菌。 4.1.3 灭菌 因为自然界里到处有微生物的存在，如空气、所有原料、水以及一切用具和器具的表面，这些微生物对食用菌菌种而言，都属于有害菌，即通常所说的杂菌。我们制作的菌种，要求绝对不能染上杂菌，所以必须进行严格灭菌。①高压蒸气灭菌 即用高压灭菌锅，通过加热增加锅内压力，使蒸气温度升高到120℃以上，在短时间内杀死一切微生物和它们的芽抱及抱子。原种用量较栽培种少，一般小批量生产使用这种灭菌方法，灭菌时间在1.5公斤/平方厘米的压力下，维持在0.5～1小时。 ②加热灭菌法 近年来普遍使用的一种方法是常压一次灭菌法，所需设备简单、投资少、成本低，适合我国农村使用。此法只要砌一个锅灶，买一口大锅，做几个蒸笼就可以了。把待杀菌的物品放入蒸笼里，从上气开始，保持蒸煮6～8小时，即可达到灭菌的目的。 ③紫外线灭菌法 开紫外灯30～40分钟，基本上可达杀菌目的，距照射物的距离以不超过1.2米为宜。注意紫外线对人体有伤害作用，所以不能用眼睛直视开着的紫外线灯，也不能开着灯工作。 4.1.4 母种分离 即通常将食用菌的子实体、土壤中的菌根、菌素分离或进行耳木分离或孢子分离，然后在培养基上培养，得到母种。作为分离母种的种菇、种耳，必须从高产、稳产、适应性强的优良品系群体中，通过挑选、对照、评审，然后择优选取个体健壮，朵形圆正，外表清洁，无病虫害的种菇或种耳，作为分离的母体。具休分离方法有以下几种①孢子弹射法 分离前把子实体用无菌水冲数遍后，用滤纸吸干表面水分。然后在接种箱或无菌室内。把种菇的菌褶朝下，用不锈钢丝勾住，悬挂在二角瓶内培养基的上方。勿使接触到培养基或四周瓶壁。瓶口用棉花塞紧。置于该菌适宜的温度下培养。一般12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养基上，形成一层白色或其他颜色的粉未状孢子印。香菇、金针菇、银耳的孢子为白色，平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色。然后用无菌接种针沾取少量的孢子，在试管中的琼脂斜面培养基上接种待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早，长势好的菌落进行转管培养即得母种。 ②组织分离法 食用菌子实体，实质就是一团分化了的菌丝体，所以可从子实体中切取一小块放在培养基上培育，就可获得母种。这种分离法属于无性繁殖。具体操作把经过筛选的优良品系的菇、耳子实体的组织块，作为分离材料。淋雨或吸水的种菇、种耳容易污染菌，一般不能作为分离材料。分离时，把种耳撕开，在菌盖和菌柄交界处或菌褶处，切取一小块组织作为接种物。银耳可以取耳片一点即可。为了减少带杂菌的机会，切取组织块时应尽量小些，可得到的纯度高的菌种。然后接到斜面试管培养基的中央，在适宜的温度下培养，当组织块上长出菌丝，并向培