微电极和膜片钳.pptVIP

微电极的特性 什么是微电极 什么是微电极？ 电极尺寸相对细胞足够小 微电极用来做什么？ 金属微电极 玻璃微电极 金属微电极阻抗 玻璃微电极阻抗 微电极阻抗的主要影响 电极阻抗很大(M?~100M ?) 有电极偏移电位 阻容电路对高频特性的影响 需驱动屏蔽和负电容补偿 负电容补偿 膜片钳记录技术 什么是膜片钳 什么是膜片？什么是钳位？ 为什么要钳位？ 为什么要做膜片的钳位？ 怎么进行钳位？ 膜等效电路 电压钳位 电压钳位的意义 电容电流和离子电流的分离 Ic=C?dV/dt 电压门控通道的变量 电压钳位电路 电压钳位的关键 膜片钳 膜片钳实验系统 防震台 倒置显微镜 微操纵器 膜片钳放大器和电极夹持器 计算机 其它：电极拉制器、屏蔽罩等 膜片钳制原理 实际膜片钳制等效 Giga-Ohm Seal 串联电阻补偿 串联电阻补偿(续) 负电容补偿：快电容 负电容补偿：慢电容 全细胞记录封接过程 电流钳位 桥平衡技术 负电容补偿 THANK YOU！ * * RA Rexc RLA RLB e A B Rinc Cd e A B Cd a a Rexc RLB e A B Rinc Cd e A B Cd RLA Rt Et Rt 无补偿：Ip=Iin Vp=Vm-IpRp=Vm-RpCin dVp/dt 补偿：Vp=Vm, Ip=0 Cin dVp/dt=Cn (kn-1)dVp/dt Cin=Cn(kn-1) 膜电位为恒定的被控值 电压钳位：膜电位为恒定的被控值。 ☆ 恒定 ☆ 可控 ☆ 跳变时间短 一种特殊的电压钳：可记录单个离子通道电流 测量电流很小：pA~nA 测量装置：极低噪声 Vm=Vp=Vcmd VI=A2(Vp+I?Rf-Vcmd) =A2?Rf ?I 问题：漏电流 串联电阻 分布电容和膜电容 正反馈补偿：Vp=Vc+aVI Vp=Vm+I?Ra 预测补偿 消除瞬态电流 提高钳位速度 提高串联电阻补偿的稳定性 电极接触到细胞膜， 阻抗略有升高 I=(Vp+Vc-Vp)/Ro=Vc/Ro Vp=Vm+I?Rp Vo=Vp-aVc= Vm+I?Rp-a I?Ro 调节W，使aRo= Rp