HearNPV在生长对数期与平台期宿主细胞中的复制差异分析(论).pdfVIP

第24卷第5期 病 毒 学 报 V01．24No．5 2 0 0 CHINESEJoURNALOFVIROLOGY 2007 7年9月 September HearNPV在生长对数期与平台期宿主细胞中的复制差异分析 代文涛1，韩霄1’2，王华林1，胡志红1，邓菲1 (1．中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室无脊椎动物病毒学联合开放 实验室，武汉430071；2．中国科学院研究生院，北京100039) 表明，HzAMl细胞生长对数期的倍增时间为22h，生长对数期的细胞以S期细胞为主(48．6％)，而平台期细胞中 以G2／M期细胞为主(72．6％)。在这两种不同状态的细胞中，病毒的复制主要在感染后60h内完成，在感染后14 ～20h，病毒复制倍增时间分别为1．8h和1．9h，几乎没有差别。但是感染生长对数期细胞时，吸附侵入细胞内的 BV数量、BV释放的数量、最终的病毒产量以及病毒表达的蛋白产量明显高于被病毒感染的生长平台期细胞。如 生长对数期细胞内复制合成的病毒DNA总量的25％装配形成BV病毒粒子出芽释放到细胞外，而对于平台期细 胞，病毒DNA仅有13％装配形成BV病毒粒子出芽释放到细胞外。病毒感染两种生长状态的细胞，病毒DNA均 从感染后7～8h开始复制，没有明显差别；而生长对数期细胞从被感染后18～20h释放子代病毒BV，生长平台期 细胞则在感染后22～25h开始释放病毒BV。在感染后30～60h，在生长对数期被感染的细胞释放BV的速度约 为483copies／cell／h，而平台期细胞约为100copies／cetl／h。最初吸附侵入到生长对数期细胞内的BV粒子数量明 显多于侵入到生长平台期细胞内的BV数量。实验证实，生长对数期与平台期的细胞膜的流动性有很大差别，推测 健康细胞表面有活性的病毒受体数量可能决定了侵入细胞内的BV的数量。 关键词：HearNPV荧光定量PCR；复制差异；细胞生长对数期；细胞生长平台期 中图分类号：Q786文献标识码：A 文章编号：1000—8721《2007)05—0399—08 当病毒感染细胞时，首先是病毒表面的蛋白与 敏感宿主细胞表面特异的受体结合。杆状病毒 究也表明，病毒在感染细胞6h后开始复制，病毒 GroupI的病毒，如苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒 DNA合成速度在18h达到最大，随后开始下降]。 (AutographacalifolmicaNucleopolyhedroviruses， 还有研究显示，在病毒感染宿主细胞过程中，如果使 AcMNPV)的出芽型病毒(BV)囊膜的一端存在大量 用相同的感染复数分别感染生长对数期细胞与生长 的病毒编码的糖蛋白GP64，参与了病毒与宿主细平台期细胞，生长对数期细胞所合成的病毒粒子及 胞表面受体的相互作用过程[1。3]，在BV感染侵入细 病毒蛋白将明显高于生长平台期细胞[8。0|。其原因 胞及从细胞内释放到胞外的过程中扮演了重要角 究竟是不同状态的细胞存在着可被利用的生物前体 色[4]。而在GroupII杆状病毒，如棉铃虫核多角体 的数量不同，还是在这两种不同状态的细胞表面可 病毒(HelicoverpaarmigeraNucleopolyhedrovir— 与膜融合蛋白相互结合的有活性的细胞表面受体的 uses，HearNPV)的BV表面，也存在着与GP64类 数量存在差异从而导致感染进入到细胞内的BV数 似功能的膜融合蛋白