硫普罗宁杂质-硫普罗宁二硫化物的分离和校正因子的测定.docVIP

精品论文 参考文献 硫普罗宁杂质-硫普罗宁二硫化物的分离和校正因子的测定 王爱华，白政忠 　　黑龙江省食品药品检验检测所，黑龙江哈尔滨150088 　　摘要：目的 建立HPLC法测定硫普罗宁有关物质。方法 采用Alltima C18（250mmtimes;4.6mm，5mu;m）色谱柱，0.05molmiddot;L-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH值至4.0）—乙腈（95：5）为流动相；检测波长为210nm；流速为0.8mlmiddot;min-1。结果 在选定的色谱条件下，硫普罗宁二硫化物与主峰均能良好的分离，校正因子为0.718。结论：本方法专属性强，灵敏度高，可准确测定硫普罗宁中的有关物质，为质量标准的修订及完善提供了依据。 　　关键词：硫普罗宁；有关物质；高效液相色谱法；校正因子 　　硫普罗宁[1-2]化学名为N-（2-巯基丙酰基）甘氨酸，是一种含游离巯基的甘氨酸衍生物，可通过清除体内自由基，保护肝线粒体结构及多种物质代谢酶，参与肝细胞蛋白质代谢与糖代谢，维持肝细胞内古胱甘肽含量，增强肝脏的解毒功能，以对抗各种肝损害，保护肝细胞结构，改善肝功能，促进肝细胞修复与再生。硫普罗宁首先在日本上市，而后德、意、美、瑞士等国相继作为改善肝功能药物应用临床[1]。硫普罗宁及其制剂各国药典均未收载。 　　本文采用高效液相色谱法测定了有关物质，可有效检测产品中的杂质量，为产品的质量控制和标准的提升提供了参考和依据。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 Aglient 1100 高效液相色谱仪仪（Aglient公司）；2695Aliance高效液相色谱仪（美国Waters公司，主要配备四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、双波长紫外检测器）； LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司，配备DAD检测器）；Milli-Q超纯水器（美国密理博公司）；Mettler Toledo XS205型电子天平（瑞士梅特勒公司，0.01mg）。 　　1.2 试药 硫普罗宁（批号，）由某药业有限公司提供。硫普罗宁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100991-200901，纯度：100.0%）。硫普罗宁二硫化物对照品（某药业公司提供，批号乙腈、磷酸均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1、 检测波长的选择 　　硫普罗宁的结构式中??巯基、羧基，为酸性化合物，破坏后的降解产物与原料的紫外吸收光谱均在210nm附近有最大吸收，故确定有关物质的检测波长定在210nm。 　　2.2、 流动相的选择及色谱柱的选择 　　表1 不同pH值对分离度的影响 　　硫普罗宁二硫化物为硫普罗宁特定杂质，为两个杂质峰，而且硫普罗宁二硫化物的这两个杂质峰对pH反应较为敏感，若不将两者完全分离，pH配制导致的误差，会导致对试验结果的判定，也无法对其质量进行控制。采用Alltima色谱柱，考察不同pH值对其分离度的影响，见表1。 　　由此可见，磷酸盐溶液的pH值为4.0时，两个二硫化物杂质峰能达到完全分离，因此确定流动相为：0.05molmiddot;L-1磷酸二氢钾溶液（磷酸调pH值至4.0）—乙腈（95：5） 　　在此色谱条件下，考察不同色谱柱对二硫化物分离度的影响，试验结果见表2： 　　由此可见，不同的色谱柱对二硫化物的分离度有较大的影响，使用250mm长的色谱柱时，二硫化物杂质能有较好的分离度，因此在进行有关物质检查时，建议使用250mm的色谱柱。并且，当二硫化物两个杂质不能完全分离时，导致二硫化物杂质量变小，使实验结果偏小，影响对二硫化物杂质量的符合性判断，而且要求二硫化物的分离度亦很有必要。 　　2.3、 二硫化物杂质峰位的确定 　　由于中检所并没有发行硫普罗宁二硫化物的杂质对照品，因此采用相对主峰保留时间来确认二硫化物的峰位。 　　试验中根据色谱条件考察和不同色谱柱的考察，发现硫普罗宁二硫化物同分异构体的两个杂质峰保留值分别约相对硫普罗宁主峰保留时间的1.8和1.9，因此通过硫普罗宁主峰的保留时间确认二硫化物的色谱峰。不同色谱柱中，硫普罗宁对照品保留时间和二硫化物对照品保留时间见表3： 　　2.4、 校正因子的确定 　　精密称取硫普罗宁对照品约10mg，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得；精密称取硫普罗宁二硫化物对照品约10mg，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。按上述色谱条件测定上述溶液，试验结果见表4。 　　因此，确定校正因子为0.718。 　　3 讨论 　　检查有关物质最常用的方法是不加校正因子的主成分自身对照法，但当校正因子超出0.9~1.1范围时，测定结果不能