对硫磷化学发光酶联免疫吸附分析方法的建立和评价研究.pdfVIP

第41卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 2期 2013年2月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 247～252 OOl：10．3724／SP．J．1096．2013．20431 对硫磷化学发光酶联免疫吸附分析方法的建立和评价 邓 浩 孔德彬 杨金易 徐振林 沈玉栋 杨星星 孙远明 (广东省食品质量安全重点实验室，华南农业大学食品学院，广州 510642) (国家肉制品质量监督检验中心 (漯河)，漯河 462000) 摘 要 建立了基于多克隆抗体的对硫磷间接竞争化学发光酶联免疫吸附分析方法(icCLEIA)。以三氯硫 磷为原料，经三步取代反应合成对硫磷半抗原，通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋 白(BSA)和卵清蛋白 (OVA)偶联，制备免疫抗原和包被抗原。经免疫新西兰大白兔，获得对硫磷抗血清。通过优化条件参数 ，建 立了对硫磷的icCLEIA分析方法。本方法的检测线性范围为0．24—15．83 g ；半抑制浓度 Ic。为 1．14 g几； 检出限为O．O9 g几；对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为74．6％一121．0％。本方法可用于实际样品中 痕量对硫磷残留检测 。 关键词 对硫磷 ；化学发光酶联免疫吸附分析；农药残留 1 引 言 对硫磷(0，O一二乙基-O一(4-硝基苯基)硫代磷酸酯)，是一种广谱高毒的有机磷酸酯类杀虫、杀螨 剂，广泛使用会对人类和环境造成危害 】。对硫磷对人畜的毒性高，中毒事件常有发生，且在食品和蔬 菜中的残留量季节性超标情况较多。因此，很多国家和地区已禁用对硫磷 ，并将其列为作物农药残留的 重要检测对象 。 目前，检测对硫磷残留的方法主要是气相色谱法、气相色谱-质谱法等，但仪器方法专一性强，分析 时间长，很难满足现场快速筛选及检测的要求刚。免疫分析方法成本低廉，选择性强，简单快速，作为仪 器方法的互补，近年来已经越来越多地应用于农药残留检测 。此前，已有关于对硫磷酶联免疫吸附 (Enzyme—linkedimmunoassay,ELISA)方法研究的报道。Zeng等吲制备了对硫磷的单克隆抗体，检出限 (Limitofdetection，LOD)为26 g几，半抑制浓度 (IC50)为360gtg／L；刘毅华等 建立了对硫磷的异源分 析ELISA方法，IC。为2．86—20．51 g／L。我国现行食品标准GB2763-2005规定蔬菜样品中的对硫磷的 最高残留量 (Maximumresiduelmiit，MRL)为0．01mgk／g剐。发展高灵敏度的酶联免疫分析方法对于控 制农药残留具有非常重要的现实意义。 化学发光酶联免疫分析法 (Chemiluminescentenzyme—linkedimmunoassay,CLEIA)是一种新型免疫 分析方法 。该方法进行检测时不需要外界光源，减少了背景干扰，可以进一步提高对硫磷检测的灵 敏度 们。Xu等[1u建立了对硫磷、三唑磷等7种有机磷农药 CLEIA多残留检测，但这种方法无法对待测 药物进行定量分析。目前，尚无对硫磷CLEIA单残留的研究报道。本研究在已获得的对硫磷半抗原和 多克隆抗体的基础上，基于鲁米诺一辣根过氧化物酶体系，建立了对硫磷化学发光酶联免疫分析方法，为 痕量对硫磷残留检测提供参考。 2 实验部分 2．1 仪器 、试剂与材料 UV一160A紫外一可见扫描仪(Et本Kyoto公司)；MK3多功能酶标仪 (美国Thermo公司)；6K-15高 速冷冻离心机(德国Sartorius公司)；MODEL1575洗板机(Bio．Rad公司)。 对硫磷标准品(德国DrE．hrenstorfer公司)；弗氏佐剂(美国Sigma公司)；辣根过氧化物酶标记羊抗 2012-04-23收稿；2012-07-06接受 本文系国家 自然科学基金 (No、国家科技支撑计划 (No．2012BAD311303)、广东省科技 计划 (Nos．2011A090200029， 2010A032000001-4，2010A090200084)资助项 目