BTH诱导黄瓜抗黄瓜炭疽病菌筛选体系的构建研究.pdf

Ⅳ 农药质量、生产及规范 BT H诱导黄瓜抗黄瓜炭疽 病菌筛选体系的构建 张永刚1 范志金1‘2 刘秀峰1 贾俊超1 马 琳1 钟增明1 1南开大学元素有机化学国家重点实验室，天津300071 2农业部农药化学及农药使用技术重点开放实验室，北京100094 ‘摘 要 与传统的杀菌剂相比较，植物诱导抗病激活剂具有独特新颖的作用机制．其研究开 发正在我国兴起，但现有的新农药筛选体系不适合该类药剂诱导活性的评估，本文选择商品化的 标准植物诱导抗病激活剂苯并噻二唑(BTH)为研究对象，从离体和活体诱导以及生理生化方面进 行该类药剂筛选体系的研究。离体测定结果表明，BTH无抑菌活性，活体诱导试验发现，该药在 极低的浓度下均可诱导黄瓜产生对黄瓜炭疽病菌的抗性，BTH的诱导间隔期为5d时诱导防效最 佳。经BTH诱导和挑战接种后黄瓜体内苯丙氨酸解氨酶(PAl。)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶 (POD)和超氧化物歧化酶(SOD)的比活力均有更显著提高，聚丙烯酰胺凝胶电泳试验发现，BTH 诱导接种后的黄瓜叶片产生病程相关蛋白(PRP)。研究结果提出了植物诱导抗病激活剂较为科 学合理的筛选方法。 关键词苯并噻二唑，系统获得抗病性，黄瓜炭疽病菌，病程相关蛋白 在侵染点产生抗病信号传播到植株其他部分而产生持久的抗性反应被称为系统获得抗性 (SystemicAcquired 产生SAR 在作物采后病害的防治中得到了广泛应用L5J。由于植物诱导抗病激活剂作用机制独特，传统 农药的生物测定和筛选方法不适合该类药剂的药效评价和毒力筛选。国内对这类药剂的研究 开发正在起步，因此，建立该类药剂完善的筛选体系显得特别重要。我国农药工作者在离体和 活体试验方面进行了有益的探索，取得了一定的成果L6j，但笔者认为由于植物诱导抗病激活 剂的作用机制复杂，在尚未明确其作用靶标的前提下，其筛选体系仍值得进一步的深入。本文 的目的就是在生理生化的基础上进行探索，以期建立植物诱导抗病激活剂较为科学合理的筛 选平台。 国家重点基础研究发展计划“973”项目(2003CBll4402)资助。 作者简介：张永刚(1982一)，男，山东临沂人，农药学硕士研究生，现在中国科学院微生物研究所攻读博士学位。 联系人：范志金(1968一)，男，博士，副教授，E—mail：fanzj@nankai．edu．cn。 131 第三届“农药与环境安全”国际学术研讨会暨 第七届“植物化学保护和全球法规一体化”国际研讨会论文集 丑 材料与方法 1．1供试材料与仪器 槽，北京六一仪器厂；DU800核酸蛋白分析仪，Beckman 振荡器(温度范围室温～100℃)，江苏省金坛市医疗仪器厂；Bion50％WG，质量分数50％，先 正达公司产品；愈创木酚，分析纯，天津市化学试剂一厂；核黄素：北京奥博星生物技术责任有限 公司；氮蓝四唑，北京朝阳区东风制药厂；甲硫氨酸，北京奥博星生物技术责任有限公司；溴酚蓝， 上海试剂三厂；丙烯酰胺，分析纯，天津市化学试剂研究所；甲叉双丙烯酰胺，北京鼎国生物技术 有限公司；过硫酸铵，分析纯．上海凌峰化学试剂有限公司；天津市化学试剂一厂；L-苯丙氨酸．北 京鼎国生物技术有限公司；邻苯二酚，分析纯，三吉利化学工业公司；其他试剂均为国产化学纯。 1．2 试验方法 1．2．1 BTH对病原真菌的离体抑茵效果 将BTH在无菌条件下稀释成5mmol／L，然后各吸取1mL药液注人培养皿内，再分别加 mL 入9 PDA培养基，摇匀后制成0．5mmol／LBTH的含药培养基平板，以添加1mL灭菌水 的培养基平板作空白对照。用直径4mm的打孔器沿菌丝外缘切取菌盘，移至含药培养基平 板上。(24±1)℃恒温培养48h后调查各处理菌盘扩展直径，计算平均值，与空白对照比较按 下式计算相对抑菌率。 100％ 椰