导向肽在磁性纳米颗粒表面上的功能化修饰研究.pdfVIP

纳米科技发展——2006年上海纳米科技与产业发展研讨会论文选 导向肽在磁性纳米颗粒表面上的功能化修饰★ 甘志锋1姜继森1”杨勇1杜冰2钱曼2章平2 (1华东师范大学物理系，纳米功能材料与器件应用研究中心，上海200062； 2华东师范大学生命科学学院，上海200062) 摘要：A54分子作为一种生物导向肽，对人肝癌BEL．7402细胞具有极强的特异亲和性。 以化学共沉淀法合成出磁性纳米颗粒，通过氢键及共价键合的作用将绿色荧光蛋 白标记的导向肽(A54．GFP)修饰结合在磁性纳米颗粒表面。采用透射电镜和穆斯 堡尔谱仪表征了磁性纳米颗粒的形貌和结构；红外光谱证实了A54一GFP分子与磁 性纳米颗粒的结合：通过等温吸附实验研究了两者的结合率。 关键词：磁性纳米颗粒；导向肽；功能化修饰 1 引言 磁性纳米颗粒因其生物相容性、特殊的磁性能，使其在生物医学领域具有 广阔的应用前景【l之】，如磁热疗、核磁共振造影成像、DNA和细胞分离与纯化、 固定化酶、靶向药物等已成为当前研究的热点。这些应用技术的一个主要研究 方面是对磁性纳米颗粒进行表面功能化修饰，使其具有良好的生物相容性和生 物活性。利用噬菌体展示技术【31所筛选到的特异性强的多肽是一种具有与肿瘤 特异性结合能力强、分子小且具有强穿透能力的靶向分子。最近，将生物导向 肽与纳米颗粒相结合以充分开发其生物医学中的应用的研究开始引起研究者的 重视。Akerman[41等开展了将由噬菌体肽库技术筛选出的对肺癌具有特异性结合 特性的导向肽与ZnS／CdSe量子点相偶联在动物体内的研究，其结果表明导向 肽与无机纳米颗粒的结合可有效地提高纳米颗粒对相应细胞的特异性结合能 力。目前，将生物导向肽与磁性纳米颗粒相结合以开发其在肿瘤的诊断、治疗 中的应用研究尚未见报道。本文通过化学共沉淀法制备合成出Fe304纳米颗粒， 主要研究了利用噬菌体肽库技术筛选到的能与肝癌特异性亲和的导向肽在磁性 纳米颗粒上的结合。 ’上海市科委纳米专项基金资助。 “联系人：姜继森，E-mail：jsjiang@phy．eenu．edu．∞ ·182· 导向肽在磁性纳米颗粒表面上的功能化修饰 2实验部分 2．1试剂与仪器 氯化铁、硫酸亚铁、氢氧化钠、碳二亚胺均购自中国医药(集团)上海化 fluorescent 学试剂公司，所有试剂均为分析纯。绿色荧光蛋白(green protein， BX51TF型荧光显微镜，Unico Nexus670型傅立叶变换红外分光光度计，Olympus UV-2802S型紫外一可见分光光度计，HH一15型振动样品磁强计。 2．2生物导向肽在磁性纳米颗粒表面的结合 加入碳二亚胺溶液使其活化。分别移取一定量的磁性液体加入磷酸盐缓冲溶液 PBS中，超声分散使之成为稳定的悬浮液；而后加入A54一GFP样品中，混合溶 液用PBS稀释，继续超声分散；而后将样品放入恒温振荡器中于20℃避光振 荡24h，直至吸附平衡。室温下用高速冷冻离心机分离样品，上层清液用于蛋 白质多肽浓度分析，分离出的粒子用于其他测试。 2．3 生物导向肽从磁性纳米颗粒表面的脱附 磁性纳米颗粒离心分离后分别加入0．5mL两种缓冲溶液中，20。C恒温振荡2h 后，分离样品，取上层清液分析蛋白质多肽的浓度。 3结果与讨论 3．1 磁性纳米颗粒的形貌和结构 Fe304纳米颗粒的形貌如图1所示，从图中可看出由化学共沉淀方法制备 的Fe304纳米颗粒主要为球形结构，粒子的直径均为5～-20nm，平均粒径约为 为llnm，与TEM数据相当。 ·183· 纳米科技发展--2006年上海纳米科技与产业发展研讨会论文选 图2样品的91外光噌图 图l Fe，Oa纳米颗粒的TEM图片 a—Fe304纳米颗粒；