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葡萄糖（GLU）测定 1.第1页页首内容 葡萄糖（GLU）测定（HK法） 天津市宝坻区人民医院检验科 操作规程文件号：CZGC/SH/014 第四版 共3页 本规程每2年复审一次 复审日期：2013年5月1日 复审人：陈玉良（签名） 规程编写者：崔树明 审批者：陈玉良 批准日期：2013年5月6日 实施日期：2013年5月10日 文件分发部门和/或个人：检验科 医务科；保管者：王文志（签名） 院长办公室；保管者：刘会芹（签名） 院档案室；保管者：刘会芹（签名） 检验科；主任：陈玉良（签名） 临床化学检验室：崔树明（签名） 2.原理 在己糖激酶催化下，葡萄糖在三磷酸腺苷（ATP）和镁离子存在的情况下被已糖激酶（HK）磷酸化，产生葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）和二磷酸腺苷（ADP）。葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）使G-6-P氧化为6-磷酸葡萄糖，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）还原为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸，还原（NADH）。在340/380nm的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比。 HK 葡萄糖 + ATP -------------﹥G-6-P+ ADP Mg2+ G6PDH G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+ 3.样本采集与处理： 3.1 病人准备：无特殊要求。 3.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。 3.3 标本类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。 3.4标本稳定性：样本须在30分钟内分离血清或血浆，2～8℃下冷藏的血清或血浆可稳定24小时，-20℃冰冻起来可稳定1个月。 3.5样本处理：血标本应尽快送检验室。室温下放置10-15min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。 4.试剂 4.1 试剂：本科使用使用华氏亚太医学科技有限公司葡萄糖检测试剂盒，LOT：041211。此试剂盒为液体单一试剂，即开既用，无须特殊准备。 4.2试剂主要成分如下： 三乙醇胺缓冲液 50mmol/L ATP 1.5mmol/L NAD 0.7mmol/L 己糖激酶 2.0KU/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 3.0KU/L 注意：1. 此试剂为体外诊断用。 2. 不要入口，吞下有害。 3. 保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。 4.3 试剂的储存与稳定性： 4.3.1未开封的试剂于2-8℃保存，稳定至有效期。 4.3.2已开封的试剂在阴暗处（2-8℃）可稳定一个月。 4.3.3避光保存，用后立即盖好封盖。 4.3.4发现试剂中有沉淀物禁止使用。 4.4 校准血清：BECKMAN公司提供，产品批号为 0115 。为冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。临用前用5ml去离子水复溶，放置30min，混匀待完全溶解后使用。复溶的血清2-8℃可稳定4天。 当有以下情况时需要重新定标： 换试剂批号或出现质控漂移时。 当仪器做完保养后。 重要零件更换时。 4.5质控品：RONDOX公司提供，LECEL-2\LEVEL-3，产品批号为759UN及551UE。冻干品，未开封者2-8℃保存至有效期。使用前用5ml去离子水复溶，30分钟后轻轻混匀，待完全溶解后使用。复溶后的血清2-8℃可稳定4天。每天随样品一起测定，测定值应在允许范围以内。 5.仪器 奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪 6操作 6.1 AU2700开机 6.1.1检查W1、W2清洗液及稀释液有足够量，不足时补充； 6.1.2打开水机水源的自来水阀门，按水机前面板的（POWER ON）键，开启水机； 6.1.3按分析仪前面板的（POWER ON）键，开启分析仪主机； 6.1.4确认打印机为开机并处于联机状态，开启中文机； 6.1.5确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足时添加，并在系统状态下的试剂状态检查试剂。 6.2 开始分析 6.2.1将兰架第一位置放水，黄架相应位置放入校准液； 6.2.2将兰架、黄架、白色标本架放入样品台上； 6.2.3用鼠标点击在屏幕最上方（开始分析）图标； 6.2.4点击屏下方（EXIT）图标，退到主屏幕。 6.3分析参数 样品体积 1.6ul 温度 37℃ 试剂1体积 240ul 方法 终点法 试剂2体积 0.0ul 单位 mmol/L 波长 340nm 定标方式 AB 读点 0-27 完整的实