植物組織培養技術.pptVIP

植物組織培養-歷史簡介 1.1902 Haberdandt首先進行植物組織培養，未獲成功。 2.1922 Knudson 蘭花無菌播種。 3.1934 White 蕃茄根尖培養，可以繼代培養。 4.1948 Skoog and Tsui煙草培養產生不定根或不定芽，取決 於auxin 及 adenin的比例。 5.1954 Muir等人 成功的由單細胞培養產生再生植株。 6.1962 Murashige and Skoog MS培養基配方。 7.1971 Takebe等人 原生質體培養產生再生植株，證實了細 胞分化全能性。 植物組織培養之原理 細胞分化全能性: 任何單胞擁有與母本相同的遺傳組成，具 有發育成與母本相同性狀的潛能。 再生: 不同植物種類具有不同再生能力，例如:非洲董葉插， 可於切口處再生新的植株。 增殖:經由細胞分裂，由少變多，由小變大。 器官發生: 再生的途徑是經由根或芽等器官之形成。 體胚發生:再生的途徑是經由胚之形成。 組織培養的特點  1. 可培養出與上一代相同特性（具相同優良品質） 的植物。 2. 可以大規模地、以小部份組織在試管內倍數不斷地培養繁殖。 3. 培養液提供養分生長較快。? 4. 必須在無菌的環境下操作， 才不會引起細菌、 黴菌感染而失敗。 組織培養之應用 1. 生產無病原健康植物體及大量繁殖； 2. 種源的保存及引種； 3. 胚培養及試管受精； 4. 花葯培養產生單倍体之育種， 5. 癒合組織及細胞懸浮培養； 6. 原生質體培養及遺傳工程。 7.藥用植物基材生產 8.二級代謝物生產 基因轉殖常用之植物組織培養系統 1.原生質體(protoplast)： 除去細胞壁之裸露的(nacked)植物細胞， 此系統可用於以原生質體融合、DNA吸入、 微注射或電孔法進行基因轉殖時。 2.葉圓片(leaf discs)： 以打洞器打下葉子的小圓片，此系統可用於 以農桿菌或基因槍進行基因轉殖時。 * * 植物組織培養技術 成 功 的 組 織 培 養 1.選取符合培養目的之培植體 2.完全的無菌控制 3.良好的人工培養基 4.適當的容器 5.良好的培養環境 植 物 組 織 培 養 方 法 ? 癒合組織培養callus culture ? 器官培養organ culture ? 胚培養embryo culture ? 懸浮細胞培養suspension cell culture ?原生質體培養 protoplast culture ? 毛狀根組織培養 hairy root cultures 莖 頂 莖頂 側芽 莖頂 節間 節位 老葉的成 功率較低 低 高 成功率 有產生癒合組織與不定芽之傾向 癒合組織 器官形成 胚形成 菊花葉片培養 產生癒合組織 花 器 花藥，花粉 花柱 花絲 子房 胚珠 萼片 花蕾內 部無菌 癒合組織 植物原生質體 原生質體分離與純化 protoplast isolation 細胞壁 液泡 細胞核 細胞膜 細胞質 原生質體 浮起的原生質體 離心，洗除酵素 細胞壁等殘渣 長出葉子的芽體 含植物荷爾蒙之誘芽培養基 含植物荷爾蒙之誘根培養基 再生植株 含特殊養分之原生質體培養基 濾紙 原生質體或細胞團 酵素液處理 原生質體培養 小細胞團移出 完整芽體切下移出 菸草原生質體 菊花原生質體 毛根狀培養 植物組織培養 之應用 植物組織培養培養商業化應用圖 ? 遺傳工程（genetic engineering） 基因轉殖(gene transformation)