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基因工程高考版
基因工程生物A 提取某基因 修饰和改造 生物B1.基因工程的基本工具限制性核酸内切酶(限制酶)——“手术刀”:来源——原核生物功能——识别特定核苷酸序列,切割特定部位的磷酸二酯键结果——形成黏性末端或平末端DNA连接酶——“缝合针”:DNA连接酶DNA聚合酶作用机理合成磷酸二酯键作用过程连接DNA片段连接脱氧核苷酸作用结果形成重组DNA形成新的是否需要模板否是运载体——“运输车”:具备的条件—— 能在受体细胞内稳定保存、大量复制,且对受体细胞无影响有一至多个限制酶切点,便于与目的基因连接 有标记基因,便于筛选常用运载体——质粒、噬菌体、动植物病毒2.基因工程的基本步骤提取目的基因:提取方法——①直接分离(限制酶)②人工合成扩增方法——PCR技术加热至90-95℃,DNA解旋——变性冷却至55-60℃,引物结合到互补DNA链——复性加热至70-75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成——延伸基因表达载体的构建:目的——使目的基因在受体细胞中稳定存在并遗传给下一代,使目的基因表达组成——目的基因+启动子+终止子+复制原点+标记基因步骤——①用限制酶切割质粒,出现黏性末端(平末端)②用限制酶切割目的基因,出现相同的黏性末端(平末端)③用DNA连接酶将质粒和目的基因结合成重组质粒将目的基因导入受体细胞:受体细胞植物体细胞动物受精卵微生物细胞常用方法农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法感受态细胞法(大肠杆菌+Ca2+)目的基因的检测和表达:检测内容目的基因时候进入受体细胞目的基因是否表达(发挥作用)检测方法标记基因是否表达、DNA分子杂交DNA和RNA分子杂交抗原-抗体杂交、个体水平DNA和RNA分子杂交抗原-抗体杂交个体水平3.基因工程的应用植物基因工程:抗虫、抗病、抗逆转基因植物,改良植物品质动物基因工程:提高动物生长速度,改善畜产品品质,用转基因动物生产药物基因治疗:把正常的外源基因导入病人体内,使该基因表达产物发挥作用4.蛋白质工程概念:以蛋白质分子的结构及其功能的关系为基础,通过基因修饰或合成,对现有蛋白质进行改造,或制造新的蛋白质,以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质)转录翻译
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