组织微阵列技术研究肿瘤转移相关基因在鼻咽癌中的表达与临床意义.docVIP

精品论文 参考文献 组织微阵列技术研究肿瘤转移相关基因在鼻咽癌中的表达与临床意义 长沙医学院基础医学院 湖南长沙 410219 摘要：目的 利用组织微阵列技术，探究肿瘤转移相关基因在鼻咽癌中的变化及临床意义。方法 在实验前制作410各点阵的鼻咽癌组织微阵列，结合免疫化检测MT1-MMP、MT2-MMP、Ezrin、 nm23-H1、TIMP-2以及E-cad 在鼻咽癌组织中的蛋白质表达，分析针对鼻咽癌侵袭转移中肿瘤转移相关基因异常表达的具体作用。结果 鼻咽癌组织中Ezrin、MT1-MMP蛋白高表达（Plt;0.05）与nm23-H1、TIMP-2蛋白低表达（Plt;0.05）。临床Ⅰ期鼻咽癌MT1-MMP 、MT2-MMP 以及 Ezrin 蛋白阳性表达低于临床Ⅱ期、临床Ⅲ和Ⅳ期鼻咽癌（Plt;0.05）。临床Ⅰ期鼻咽癌组织中 nm23-H1阳性表达明显高于临床Ⅱ期、临床Ⅲ和Ⅳ期鼻咽癌（Plt;0.05）。结论 在鼻咽癌淋巴结转移以及临床发展中，多个肿瘤转移基因的蛋白质低表达，转移抑制基因的高表达以及这些基因的蛋白质表达失平衡的作用较为明显。 关键词：组织微阵列技术；肿瘤转移相关基因；鼻咽癌；临床意义 鼻咽癌易引发颈部淋巴结转移，然而鼻咽癌转移、侵袭的分子机制并不明确[1]。为此笔者利用组织微阵列技术，结合免疫化检测MT1-MMP、MT2-MMP、Ezrin、 nm23-H1、TIMP-2以及E-cad 在鼻咽癌组织中的蛋白质表达，探究肿瘤转移相关基因在鼻咽癌中的变化及临床意义，现具体情况报道如下。 1.资料与方法 1.1一般资料 在实验前制作410各点阵的鼻咽癌组织微阵列。组织微阵列切片包括了鼻咽部的恶性病变标本以及良性标本346例，其中鼻咽癌163例，癌旁鼻咽上皮92例，鼻炎慢性炎性粘膜上皮91例。而这163例鼻咽癌中，临床Ⅰ期41例，Ⅱ期55例，Ⅳ期、Ⅲ期67例；在这163例鼻咽癌中，通过临床检查以及CT检测，确诊颈淋巴结转移有99例，无淋巴结转移64例。本次研究所用病例的一般资料均无明显差异，具有可比性。 1.2方法 （1）主要试剂：MT1-MMP、MT2-MMP、nm23-H1、E-cad、TIMP-2 以及Ezrin，利用免疫组化检测试剂盒、非正常免疫羊、兔血清以及显示试剂盒进行免疫组化检测。 （2）具体操作：现将组织微阵列切片进行脱蜡以及水化处理后，放置在3%的过氧化氢中室温半小时，隔绝内源性过氧化物酶。然后按照相关修复方法，将组织微阵列切片放在0.01mol/L的柠檬酸盐缓冲液内，进行微波抗原修复二十分钟；或利用0.1%的胰蛋白酶进行酶消化抗原修复，在37℃温度下，消化二十五分钟。将正常羊兔血清在室温封闭半小时，并在切片中滴加一抗进行观察。 1.3结果评估 按照蛋白质的阳性细胞数以及阳性强度进行评价，阳性细胞数：阳性表达细胞在25%以下，计1分；在24%至50%，计2分；在50%以上，计3分。阳性染色强度：细胞无染色，计0分；细胞呈浅红色，计1分；细胞呈红色，计2分；细胞呈深红色，计3分。以上述两种得分乘积作为最终的计分结果，0分为阴性，0分以上则为阳性。 1.4统计学意义 所有数据资料利用SPSS19.0软件包进行统计学分析，利用X2对计数数据进行检验，Plt;0.05差异具有统计学意义。 2.结果 2.1组织微阵列中鼻咽癌转移相关基因的蛋白质表达 MT1-MMP以及 Ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的阳性表达高于鼻咽炎性上皮（Plt;0.05）。慢性炎性鼻咽上皮组织以及癌旁鼻炎上皮中 MT1-MMP、Ezrin 蛋白的阳性表达对比，差异不明显（Pgt;0.05）。鼻咽癌组织中 TIMP-2以及 nm23-H1蛋白的阳性表达明显低于其在癌旁鼻咽上皮组织、鼻咽炎性黏膜上皮中的表达（Plt;0.05），而 MT2-MMP 以及E-cad 蛋白在鼻咽癌、慢性炎性鼻咽上皮、癌旁鼻咽上皮组织中的表达差异并不明显（Pgt;0.05），表1。 2.2鼻咽癌临床病理特征和转移相关基因蛋白质表达之间的关系 临床Ⅰ期鼻咽癌 Ezrin、MT1-MMP 以及MT2-MMP蛋白阳性表达低于临床Ⅱ期、临床Ⅲ期、Ⅳ期鼻咽癌，差异明显具有统计意义（P lt;0.05）。临床Ⅰ期鼻咽癌组织中 nm23-H1阳性表达则明显高于临床Ⅱ期、临床Ⅲ和Ⅳ期鼻咽癌（P lt; 0.05）。淋巴结转移鼻咽癌中 nm23-H1 蛋白表 达 明显 低 于 无 转 移 鼻 咽 癌（P lt; 0.05）