结核分枝杆菌实验室快速诊断技术进展.docVIP

精品论文 参考文献 结核分枝杆菌实验室快速诊断技术进展 韦丽娟 (宜州市疾病预防控制中心 广西 宜州 546300) 【摘 要】结核病是由结核分枝杆菌引起的传染病。它已成为严重危害人民身体健康、发病率及病死率很高的传染病。建立快速、准确、敏感、特异以及简便的诊断方法 是全球控制结核蔓延的关键。笔者就近年来结核分枝杆菌实验室快速诊断技术作一综述。 【关键词】结核分枝杆菌；结核病；快速诊断技术 结核病是由结核分枝杆菌感染的一种重要的传染病，是世界范围内发病率和致死 率都较高的疾病之一，每年新增900 万患者，其中300 万死亡[1]，而中国结核病发病 人数居世界第二位，是22 个结核病高负担国家之一[2]。结核病的实验室诊断是发现 传染源的主要途径和手段，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据，长期以来，结 核分枝杆菌的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。由于方法所限，严重影响 了结核病的及时诊断，因此建立检测快速、灵敏度高、特异性强的诊断方法，对于结 核病防治工作具有重要意义[3]。现将近年来结核分枝杆菌实验室快速诊断技术作一综 述。 １ 结核分枝杆菌快速培养技术 1.1 噬菌体生物扩增法 该方法的基本原理是分枝杆菌噬菌体能感染活的分枝杆 菌，未进入感染菌体内的噬菌体被随后加入的杀毒剂灭活，已进入菌体内的噬菌体不 受影响，噬菌体在感染菌体内大量增殖，并将菌体裂解，释放出的子代噬菌体可感染 随后加入的指示细胞，并将其裂解，在琼脂平板上出现透亮的噬菌斑，因此，只要根 据噬菌斑的有无即可判断待检标本中是否存在活的结核分枝杆菌[4]。近年来分枝杆菌 噬菌体在结核病快速诊断的研究报道很多，文献[5-6]的应用研究显示，噬菌体生物扩 增法检测结核病标本的阳性率高于涂片和罗氏培养，且操作简便、快速、灵敏度高、 特异性强，可作为临床结核分枝杆菌的快速检测方法。 .2 全自动培养系统 全自动培养系统已进入临床应用，如BACTEC-TB-460 系 统、BACTEC MCIT9600 系统、BACTEC9000MB 系统、ESP 培养系统Ⅱ和MB/BacT 系统等。MCIT9600 系统具有高容量、安全、无交??污染、无放射性污染、自动存储 数据等优点。与之相比，BACTEC9000MB 系统由于ＭＢ系统含有较多培养基而使标 本稀释，因而使检出率大大降低。ESPⅡ培养系统检测耗时长，假阳性率高[7]。与传 统培养法比，全自动培养系统提高了分枝杆菌的分离率，缩短了培养时间，但仍不能 完全取代传统培养法，标本在首次分离中可以与传统培养法联合使用，以提高检出率。 2 免疫学技术 免疫学技术是以抗原和抗体的特异性结合反应为基础，再辅以免疫放大技术来鉴 别细菌，通过病原体刺激机体产生免疫球蛋白(抗体)的方法。 2.1 酶联免疫吸附试验(ELISA) 酶联免疫吸附技术是建立在免疫酶基础上的一种 新型免疫测定技术，具有特异性强、敏感性高等优点。主要应用ELISA 方法检测结 核病人血清中的特异性抗体或抗原。机体受到结核杆菌感染后，体内首先出现的是结 核抗原，因此检测结核抗原具有早期诊断价值。此方法作为结核病的新型诊断方法敏 感性高、特异性强，据张周云等[8]报道此方法的检测敏感性可达84.17%，特异性达 92.19%。 2．2 免疫金标技术 斑点免疫金渗滤试验(DIGFA)是免疫金标技术的一种，该 方法比ELISA 更为简便、快速，全程只需3～5min，并可单人份测定，由于操作简单， 检测迅速，检出率高，不需要贵重仪器设备，能快速测定抗结核抗体，是一种较为理 想的临床结核病辅助诊断方法[9].陈俊林等［10］试验报道利用此法检测结果与传统 菌种鉴定实验的结果符合性很高，敏感度为99.1%，特异度为100%。 2.3 酶联免疫斑点技术 酶联免疫斑点(ELI Spot) 技术是测定Ｔ细胞表面特异的 早期分泌抗原-6(ESAT-6)和培养滤出液蛋白-10(CFP-10)。本法可区分结核感染者和 接种BCG 的健康人群。优点是灵敏、特异、快速，12h 获得结果，有利于结核感染者 和活动性结核病人的早期诊断，将成为基础和临床实验研究的标准技术[11]。 3 分子生物学技术 3.1 聚合酶链反应(PCR)技术 PCR 技术是一项体外酶促扩增DNA 技术，具有 特异性强、敏感性高、操作简便、快速高效等特点。 有研究显示PCR 扩增结核分枝杆 菌DNA 应用于结核病诊断的准确性为98.8%，特异度为100.0%，敏感度为74