抗鸡传染性法氏囊病病毒中和性单克隆抗体的鉴定研究.pdfVIP

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 371 抗鸡传染性法氏囊病病毒中和性单克隆抗体的鉴定 肖治军“张改平1杨汉春2扬艳艳1李学伍1邓瑞广1赵冬1邢广旭 (1河南省农业科学院郑州45(X)02，2中国农业大学动物医学院北京100091) 摘要：本研究用固定病毒一稀释单抗的细胞中和试验测定了单抗的中和效价；将单抗与病毒反应寝接种 到IBD抗体阴性的鸡体中，测定了试验鸡的法氏囊指数(法氏囊重／鸡体重)及鸡法氏囊中的IBDV。结果显示， 1l株单抗对IBDV细胞毒均有较高的中和效价；4株单抗中和组鸡与空白对照鸡的法氏囊均耒检出IBDV，这 两组鸡的法氏囊指数没有显著差异(PO．05)；而攻毒组鸡的法氏囊均检出IBDV，攻毒组鸡与空白对照鸡的法 的IBDV均反应阴性。结果表明，所测的抗IBDV单抗为中和性单抗，而且可能是构像性中和性单抗。 关键词：鸡传染性法氏囊病病毒；单克隆抗体；中和活性；测定 性、免疫抑制性疾病。该病在我国各地鸡群中时常发生，并表现出病毒的抗原性或毒力变异，给我国 养鸡业带来了巨大的经济损失和危害“J。抗IBDV的中和性单克隆抗体，是用来研究IBDV中和性抗原 表位以及研发特异性诊断试剂的理想工具。作者通过细胞和鸡体中和试验，显示所用的抗IBDV的单 克降抗体为中和性单克隆抗体，而且可能是构像依赖型中和性单抗，为IBDV的分子免疫机制研究和 分子流行病学调查提供了基础。 1材料与方法 1．1材料 IBD阳性血清，购自中国兽药监察所。IBDVJjC7毒株(编号BV)，购自中国兽药监察所，使用前SPF 鸡胚传l代并测定其毒价；IBDVP毒株(编号PV)，本地分离I型毒，适应鸡胚成纤维细胞(CEF) L、M、N的培养上清或腹水，由本室制备”J。24 营养液，购自Invitrogen公司；超级新生牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司。辣根过氧化物酶 快速检测试纸条，河南百奥生物工程公司制备。8urn孔径硝酸纤维素膜(AE99)，德国ss公司。 1．2|BDV的毒价测定 将待测IBDV毒液用无菌生理盐水配成几个10倍递增稀释浓度，将每个稀释度毒液通过绒毛尿囊 120h内每个病毒浓度中出现IBDV所致典型病变的死活鸡胚数目；将出现病变的鸡胚研磨、冻融3次 作者简介：肖治军(19“一)。男，湖南郴州人，副研究员，硕士，从事动物分子病毒学与免疫学研究 E-mail：zjxbio@yahoo．c0111．Cll，电话；0371- 372 中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术研讨会论文集 1．3固定病毒稀释单抗的细胞中和试验 等量混合(全设为病毒对照)，均37℃反应lh；然后将上述混合液分别加入到长成的CEF单层中，设 应单抗做免疫酶染色试验…。 1．4单抗与病毒在鸡体的中和试验 等量混合，37℃反应lh，分别将这两种混合液通过滴鼻、点眼途径接种28日龄非免疫鸡(常规AGP 检测其IBD抗体均为阴性)；只接种阴性对照液的鸡设为空白对照组；每组5只鸡，分别隔离饲养。观 察记录各组鸡的发病死亡情况，接种后5天宰杀全部鸡并秤各组鸡只的体重及其法氏囊重。将秤重后 的鸡法氏囊研磨．反复冻融3次，取其上清，用IBDV快速检测试纸条检测其上清中是否含有IBDV【4】。 1．5单抗与变性处理前后IBDV的Dot—ELISA 将从攻毒鸡法氏囊中超速离心提纯的IBDV{61、IBD—AGP抗原和正常鸡法氏囊超速离心提取物， J。 2结果 2．1 IBDV的毒价测定 性病变：鸡胚萎缩、腹部或头部明显水肿、皮肤出血、趾爪部常见出血、肝有出血斑和坏死灶、肾肿 的典型性CPE：细胞园缩变小、颗粒化、折光性增强、聚集脱落。所用IBDV的毒价测定结果见表1。 7 2。 壅! !曼旦∑焦旦查壅笪童丛型室笙墨f!!!堕!：旦!!!堕堕塑型!坐里!堕!堕!曼旦y!!堕!也 IBDV测定指标