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本 科 毕 业 论 文作 者专业 二〇年 本人郑重声明：本人所呈交的毕业论文，是在导师 指导下独立研究取得的成果。毕业论文中凡引用他人已经发表的成果、数据、观点等，均已明确注明出处。除文中已注明引用的内容外，不包含任何其他个人或集体已发表的论文。若有抄袭，愿承担一切后果。 特此声明 完成人签名： 年 月 日 脱细胞支架的胎儿细胞注射 摘要：建立体外心肌细胞分离培养、纯化和鉴定方法。[方法]若干只小鼠分10次采用分离消化法培养心肌细胞,分别用A、B、C、D 4组不同培养液培养,以Ficoll梯度液纯化,进行Desmin免疫组化鉴定。[结果]心肌细胞培养后经台盼蓝检查成活率达95%以上,在接种后4～5 d增殖达高峰,A、B、C 3组培养液对心肌细胞的培养效果无差异。Ficoll分离纯化的心肌细胞纯度较高,有97%的心肌细胞Desmin胞浆呈阳性反应。[结果]采用Ficoll纯化以国产血清培养,可获得高产量高纯度的心肌细胞。 关键词：脱细胞；支架；胎儿细胞 From fetal cells were injected Abstract: To establish a practical met hods of t he culture,purification and identification of mouse myoblast s in vit ro.Met hods：Muscle samples of 40 mice were minced and digested wit h t rypsin,cul2t ured wit h four kinds of media namely A,B,C,and D,finally purified wit h Ficoll gradient liquid.Myogenesis were dynamically observed,myoblast were tested by Desmin immunohistochemist ry stains.Result：The my 2 oblast cell viability is up to 95%by Trypan blue,t he cell proliferation arrived climax during 4～5 day after planted.There is no difference between A,B,and C cult ure liquid.The cell purity is up to 97%by Desmin im 2 munohistochemical stains test.Conclusion：Myoblast s could be purified by Ficoll and cult ured wit h DM EM cul2 t ure liquid contained serum made in our count ry,in high quantity. Key words:Take off， Stents， Fetal cells 1 引言 目前全世界有2200万人感染了心脏衰竭。在同种异体移植中，已有肾、肝、心、肺、小肠、骨关节等移植成功的报道。但同种异体组织、器官仍有供者严重不足的困难。因此，寻找异种移植源成为现代移植外科研究的前沿。异种移植与同种异体移植一样，克服排斥反应将是今后研究的重点，但实质器官如心、肝、肾的异种移植一旦失败，则意味着患者丧失生命。心脏移植仍然是最终确定的治疗心脏衰竭阶段，但捐赠器官的供应是有限的。一旦心脏移植后，往往需要以交换高血压，糖尿病和肾衰竭为代价。目前能够有较完善的方法制取脱细胞的支架，而且现在已有报道美国研究者在实验室里诱导死亡老鼠心脏再次跳动，这个发现可能会在将来某一天为人类定制组织器官。首先是制作一个脱细胞的可以灌注的血管结构，冲洗存在死亡老鼠心脏的细胞同时使胶原蛋白基本结构保持不变。用新生老鼠的心脏细胞注射给这个像透明胶质，给予脱细胞支架丰富的营养并流他们在实验室里生长，四天后心脏开始收缩。如今发现的这个新方法，从理论上讲，猪心或人捐赠的心脏不再作移植可行的一天，可以去除其细胞，并通过上述过程，帮助需要新的心脏瓣膜或新的心脏的人们。 2 简单脱细胞支架制备制霉菌素 图1：心肌细胞培养 培养的细胞经4 g/L台盼蓝染色计数,约有95%以上的细胞不着色,说明二步消化法分离培养的细胞成活率较高。分别用A、B两组培养液培养纯化后的细胞连续计数绘制生长曲线显示,心肌细 胞在培养第4～6天增殖达高峰,两组在各时间段均无差异(P