生物技术在其他方面的应用DNA的粗提取与鉴定DNA与蛋白质在.PPT

* * 生物技术在其他方面的应用 DNA的粗提取与鉴定 1．DNA与蛋白质在NaCl溶液中溶解度比较。 析出 溶解 DNA 溶解规律 0.14 mol/L NaCl溶液 2 mol/L NaCl溶液 NaCl溶液从2 mol/L降低过程中，溶解度逐渐增大 溶解 部分发生 盐析沉淀 蛋白质 2.DNA粗提取与鉴定中不同试剂的用途及原理比较。 除去血液中的钙离子，防止血液凝固 抗凝剂 0.03 g/mL 柠檬 酸钠 △ DNA遇二苯胺(沸水浴)会变蓝色 鉴定剂 二 苯胺 3.DNA粗提取实验材料和方法的选择。 (1)不同生物的组织中DNA含量不同。 在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。 (2)材料不同所采用的提取方法不同。 ①植物组织：取材→研磨→过滤→沉淀。 ②鸡血：制备鸡血细胞液→提取核DNA→溶解细胞核内DNA→析出并滤取DNA→DNA再溶解→提取较纯净的DNA。 4．DNA的析出与鉴定。 (1)析出：将处理后的溶液过滤，加入与滤液等体积的冷却酒精溶液(体积分数为95%)静置2～3 min，溶液中会出现白色丝状物(此即粗提取的DNA)，且玻璃棒沿一个方向搅拌卷起丝状物。 (2)鉴定： ?特别提醒： 1.不能正确区分动植物细胞获取含DNA滤液的原理和方法。 (1)动植物细胞获取含DNA滤液的原理和方法。 在切碎的洋葱中加入一定量的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液 洗涤剂能够瓦解细胞膜 植物细胞(洋葱) 在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液 在低渗溶液中会吸水涨破 动物细胞(鸡血细胞) 操作 原理 (2)实验中2次加蒸馏水、3次加氯化钠溶液和6次搅拌的作用。 ①2次加蒸馏水：第一次是在第一步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第三步，是为了稀释氯化钠溶液。 ②3次加氯化钠溶液：第一次加氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中。第二次加氯化钠溶液是为了DNA的再溶解，这时溶液中的蛋白质含量已很少。第三次加氯化钠溶液是为了再次溶解DNA。 ③6次搅拌：除最后一次搅拌外，前5次搅拌均要朝一个方向。并且，在析出DNA、DNA再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止DNA分子断裂。 2．高考命题角度。 (1)原料、试剂角度：考查提取DNA的原料、试剂和方法。 (2)操作流程：考查DNA提取的操作过程及注意事项。 【例1】　在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述中正确的是(　　) A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同 解析：用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L时，滤取析出物；将丝状物溶解在2 mol/L的NaCl中，加入二苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；用菜花替代鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节NaCl溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故B正确。 答案：B 跟踪训练 DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精溶液，而细胞中的某些物质溶于酒精溶液。下图“DNA的粗提取”实验的相关操作步骤，其操作目的错误的是(　　) A．①是洗涤红细胞，去除红细胞表面的杂质 B．②是稀释NaCl溶液至0.14 mol/L，析出DNA C．③是选用2 mol/L NaCl溶液，溶解黏稠物中的DNA D．④是纯化DNA，去除溶于95%酒精的杂质 解析：①过程是让鸡血细胞吸水涨破释放出DNA；②是降低NaCl溶液的浓度，析出DNA；③是对析出的DNA再溶解，除去不溶于2 mol/L NaCl 溶液中的杂质；④用95%的酒精析出DNA。 答案：A PCR技术的基本操作和应用 1．细胞内DNA复制与PCR技术的比较。 温度 酶 解旋 ①需提供DNA复制的模板 ②四种脱氧核苷酸为原料 ③子链延伸的方向都是从5′端到3′端 相同点 DNA和RNA 体内温和条件 Taq DNA聚合酶 DNA解旋酶、DNA聚合酶 80～100 ℃高温解旋，双链完全分开 在DNA解旋酶作用下，边解旋边复制 不同点 PCR 细胞内DNA复制 2.PCR的反应过程。 (1)变性：当温度上升到90 ℃以上时，双链DNA解聚为单链，如下图： (2)复性：温度下降到50 ℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合，如下图： (