用分泌型萤光素酶报告系统比较TTR启动子与CMV启动子的体内外.PDF

第 25 卷 　 第 6 期 病 　　毒 　　学 　　报 Vol . 25 　No . 6 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　　　 2 0 0 9 年 11 月 CH IN ESE J OU RN AL O F V IROL O GY November 2009 用分泌型萤光素酶报告系统比较 TTR 启动子与 CMV 启动子的体内外表达特性 1 ,2 # 2 # 2 2 ,3 1 2 罗顺涛 , 田文洪 ,王刚 ,董小岩 ,杨莉 ,吴小兵 ( 1. 四川大学 　华西医院　生物治疗国家重点实验室 ,成都 　6 1004 1 ; 2 . 中国疾病预防控制中心 　病毒病预防控制所 　病毒基因工程国家重点实验室 ,北京 　100052 ; 3 . 北京五加和分子医学研究所有限公司 ,北京 　100 176) 摘要 : GL uc ( Gauss i a L ucifera se) 是一种高灵敏度分泌型萤光素酶 。本研究利用 GL uc 的易分泌 、高灵敏性和检测 ( ) ( ) 方法简单快速的特点 ,初步比较了 T TR 启动子 PTTR 与 CMV 启动子 PCMV 的体内外表达特性 。首先构建了两种 启动子报告基因表达质粒 p AAV2neoT TRGL uc 和 p AAV2neoCMVGL uc 。用脂质体转染法将它们分别转染 至两株肝细胞源的细胞株 Huh7 与 Hep G2 以及两株非肝细胞源细胞株 H E K293 与 HeL a S3 。在转染后不同时间 μ μ 点取细胞培养上清液检测 GL uc 的表达 。此外采用水动力注射法 ,将这两种质粒分别以注射剂量 0 . 1 g 、1 g 和 μ ( μ ) 10 g/ 只经尾静脉注射至 BALB/ c 小鼠体内,注射后 2h 开始在不同时间点上经尾静脉采集全血 2 . 5 l/ 次 并测定 血液中的 GL uc 水平 。细胞实验结果显示 , PCMV 介导的 GL uc 表达都明显高于 PTTR ;然而 ,在 H E K293 和 HeL a S3 细胞中 PCMV 比 P TTR 的表达水平高 50～300 倍 ,而在 Huh7 和 Hep G2 中仅高 10 倍以内,提示 PTTR 具有相对的肝细 胞特异性 。在小鼠实验中 ,PCMV 介导的 GL uc 表达在各剂量组中也明显高于 P TTR ,然而它们表达水平变化特征明 显不同:PCMV 介导的 GL uc 表达在质粒注射后约 10h 达到最大值 ,此后迅速下降;而 PTTR 介导的 GL uc 表达在质粒 注射后约 48h 达到峰值 ,随后缓慢下降。上述实验结果提示 ,PTTR 虽然在表达强度方面