昆白鼠囊胚在饲养层上的生长行为研究.pdfVIP

昆白鼠囊肝在饲养层上的生长行为 中文摘要 目的:比较了自然孵化法、去透明带法，免疫外科法去滋养层三种方法对胚胎贴 壁率、平均贴壁时间及ICM克隆形成率的影响。观察了鼠囊胚在小鼠原代胎儿 成纤维细胞饲养层上的生长行为。方法:超排卵获得囊胚共93枚，随机分成A, B,C三组。分别采用A组:自然孵化法;B组:去透明带法;C组:免疫外科 法去滋养层，分离获得ICMa观察鼠囊胚及lcm在饲养层上的生长行为。结果: 三组胚胎贴壁率、lcm克隆形成率、平均贴壁时间分别为A组:83%,83%, 36-48h;B组:82%,82%,24-36h;C组:71%,?l%,24-36h。滋养层细 胞与lcm同时增殖，但滋养层细胞扩展范围小，不形成一层半透明膜状结构。 lcm在接种后第45d时能够充分增殖且未分化，垂直隆起生长，呈典型的卵圆 柱状结构。结论:三种方法对胚胎贴壁率、lcm 克隆形成率无显著差异，去透 明带法、免疫外科法使胚胎平均贴壁时间短于自然孵化法。滋养层细胞与lcm 同时增殖，但滋养层细胞扩展范围小，仅限于ICM的周围。lcm在接种后第6 天时，典型的卵圆柱状结构则衍变成多层柱状结构，表面覆盖有大量内胚层样细 胞，AKP染色呈弱阳性，此时，分离ES细胞的成功率较低。 1关键词l:自然孵化;免疫外科;囊胚;内细胞团:滋养层细胞 昆白鼠囊胚在饲养层上的生长行为 Abstract ObjectiveTocomparetheeffectofthenaturalhatching，zonapellucida removal,immunosurgeryonthemouseblastocystattachmentefficiency,average attachmenttimeandlCMcloningefficiency.Toobservethemouseblastocystgrowth behaviorontheprimarymouseembryonicfibroblastfeederlayers(PMEF).Method Mouseblastocystswereobtainedbyovarianhyperstimulationanddividedintothree groupsatrandom.GroupA:naturalhatching，GroupB:zonapellucidaremoval; GroupC:trophectodermcellsremovalbyimmunosurgerytotakeouttheICM. ResultsAttachmentefficiency,ICMcloningefficiencyandaverageattachmenttime wererespectively83%,83%,36--48hingroupA，82%,82%,24-36hingroupBand 71%,71%,24-36hingroupC.TrophectodermcellsandICMproliferatedatthe sametime.Trophectodermcellsdidntexpandtoawiderangeanddidntform translucentfilmlikestructureonthefeederlayers.ICMgrewinmoreroundedclumps beforethedifferentiation.ConclusionThereisnosi娜ficantdifferencebetweenthree groupsinblastocystattachmentefficiencyandICMcloningefficiency(P0.05).The averageattachmenttimeisshorteringroupBandgroupCthanthatingroupA. TrophectodermcellsandICMproliferatedatthesametimeandexpandedaroundthe ICMcellswithoutformingtoawiderange.ThetypicalshapeoftheICMturnedtoa kindofcolumnstructurewithmanylayersandthelCMcellsdifferentiat