昆虫病原线虫rDNA多态性分析及生化特性研讨.pdf

摘 要 一 ...，坦 摘 要 昆虫病原线虫斯氏线虫属Steinernem。和异小杆线虫属Heterorhabditis广泛应用 于防治多种农林和卫生重要害虫，是一类己经可以进行大规模商业化生产的有效的 生物防治制剂。准确、快速的线虫分类鉴定方法的建立是发挥昆虫病原线虫在害虫 生物防治方面的应用潜能的必要前提:同样，优化线虫质量的控制方案，确定线虫 产品的质量指标也是昆虫病原线虫商业化的必然要求。本论文以 :DNAITS PCR-RFLP方法分析了国内外47个品系的昆虫病原线虫的rDNAITS多态性，并测 定了4个人工组建的昆虫病原线虫一共生细菌组合的致病力、生化特性和rDNAITS RFLP图谱。 以ITS引物进行PCR扩增，47个品系的昆虫病原线虫均可以产生大小约为l.lkb 的片段，所有品系的ITS区无长度差异。然而.以AluI,Dde 、HaeIII、Hin6l, HindIII,HinfI,Mbo1,Pau11,RsaI共9种限制性内切酶对47个线虫品系线虫的 ITSPCR扩增产物进行消化酶切。产生了多种不同的RFLP图谱。内切酶Alu1,Dde 1,Hinfl,Hin6I,Mbo1,Rsa1,Hae111,HindIII和Pau11分别产生16,18,14, 15,16,17,5,3,9种酶切图谱。酶切图谱在已描述的线虫种间差异明显，同种 的品系间基本一致。这说明rDNAITSPCR-RFLP是线虫种类鉴定的一种有效的辅 助方法。 对酶切结果进行聚类分析，构建了分子系统树。结果表明所分析的47个线虫品 系可分为异小杆线虫属Heterorhabditis和斯氏线虫属Steinernema两大类，分别分为 4个组和11个组。而异小杆线虫属包括以下4组:印度异小杆线虫H.indica组、 嗜菌异小杆线虫H.bacteriophora组、大异小杆线虫H.megid。组和新西兰异小杆 线虫H.zealandica组。采自中国海南省的异小杆线虫的6个品系的9个内切酶图谱 与印度异小杆线虫的LN2品系完全相同，归类为印度异小杆线虫组。结果证实了印 度异小杆线虫为遍及热带、亚热带的全球性分布种类.异小杆线虫的H06品系、Q6 品系、V16品系和标注为新西兰异小杆线虫HzealandicaHe品系均归类为嗜菌异小 杆线虫组。内切酶MboI把H06品系从该组区分出来。大异小杆线虫组包括H.meg 和HNA品系，以RsaI酶能将它们区分开来。有趣的是，标注为新西兰异小杆线虫 Hzealandica的He品系与异小杆线虫的Q6品系和V16品系的9种酶切图谱都相同， 可能原因是HzealandicaHe被错误描述.它应该归属于嗜菌异小杆线虫。 在斯氏属线虫中，已知种类丽金龟斯氏线虫S.arnariwn、小卷蛾斯氏线虫S. carpocapsae、夜蛾斯氏线虫￡feltiae,蛾姑斯氏线虫scapterisci和格氏线虫S. glaseri分别属于5个不同的组。其中，在格氏线虫组中，由于NC27。品系与同种的 其它3个品系相比出现较大的变异，格氏线虫组被分为2个亚组。另6组分别是: 第1组为采自中国福建的斯氏线虫的ZH-1品系、ZH-2品系.ZH-3品系、ZH一品 系、XIA-1品系、XIA-2品系和采自海南海口的斯氏线虫HK-H品系、HK-2品系、 HK-4品系、HK-5品系。第2组为采自中国山东的斯氏线虫X-7品系和采自河北的 1 华南农业大学硕士学位论文 昆虫病原线虫rDNA多态性分析及生化特性研究 斯氏线虫CB2B品系。第3组为采自北京的斯氏线虫CB8720品系。第4组为采自 美国的斯氏线虫ED/1品系。第5组为采自美国的斯氏线虫NC60品系。第6组是采 白海南的斯氏线虫SY-5品系。SAR品系与SAV品系具有 100%相似性，被归属于 丽金龟斯氏线虫组。小卷蛾斯氏线虫、夜蛾斯氏线虫和格氏线虫(除NC270品系外) 的种内品系间的酶切图谱一致。采自中国福建的6个斯氏线虫品系 (ZH-1品系、 ZH-2品系、ZH-3品系、ZH一品系、XIA-l品系、XIA-2品系)之间的酶切图谱没 有多态性，以Dde1.Hin6I内切酶能把采自中国海口