理性和非理性蛋白质设计策略在酶工程中应用_cropped.docVIP

 科 技 通 报 BULLETIN OF SCIENCE AND TECHNOLOGY 第 23 卷 第 2 期 2007 年 3 月 Vol.23 No.2 Mar. 2007 理性和非理性蛋白质设计策略在酶工程中应用 张秀艳 1, 何国庆 2, 陈启和 2 ( 1. 华中农业大学食品安全与微生物学系, 武汉 430070; 2. 浙江大学食品科学与营养系, 杭州 310029) 摘 要: 理性和非理性的蛋白质设计策略是两个非常有效的酶改性工具。在对酶性质改造方面已取得 了可喜的成绩。本文将两种蛋白质设计策略的特点、各自使用的方法、进化路线及最近三年在酶工程改 造上取得的成就加以总结。并讨论了两种蛋白质设计策略的区别、联系及蛋白质工程改造的未来发展 方向。 关键词: 理性蛋白质设计; 非理性蛋白质设计; 酶工程; 蛋白质工程 中图分类号: Q814 文献标识码: A 文章编号: 1001- 7119( 2007) 02- 0191- 07 Using of the Rational and Ir r ational Pr otein Design Str ategies in Enzyme Engineer ing ZHANG Xiu-yan1, HE Guo-qing2, CHEN Qi-he2 ( 1. Department of Food Safety and microbiology, Huazhong Agriculture University, Wuhan 430070, China; 2. Department of Food Science and Nutrition, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China) Abstr act: Rational and irrational protein design strategies are two effective strategies to improve the enzyme. The two approaches have made a great success. This article summarized the characteristics, evolution approach, evolution routines and the successful examples of the two protein modification strategies. Additionally, the differences, relations and future development of the two strategies were discussed. Key wor ds: rational protein design; irrational protein designs; enzyme engineering; protein engineering 酶在工业上的应用已有很久的历史, 生物催 化剂所表现出的高效、专一的催化活性使它远远 优于化学催化剂, 特别是近几年, 随着基因操作 技术的发展, 使得酶能以合理的价格得到供应, 酶在工业上得到越来越广泛的应用。然而, 天然 酶的性能往往不能满足工业生产的实际需要。为 了得到能满足实际生产所需要的酶, 科学家们常 常 通过计算机辅助分子模型结合定点突变或直 接采用定向进化技术对酶进行改造。前者属于理 性的设计方法, 后者属于非理性的设计方法。 理性和非理性蛋白质设计策略特 点及应用 1 1.1 理性蛋白质设计的特点及应用 在理性设计中, 首先要根据蛋白质的结构, 收稿日期: 2005- 11- 07 基金项目: 国家自然科学基金( 资助 作者简介: 张秀艳( 1973- ) , 女, 河南南阳人, 讲师, 主要从事食品微生物和分子生物学研究。E-mail: xiuyanzhang73@126.com. 功能和机制等详细资料对氨基酸序列中要突变 的位点进行精确设计, 然后通过取代、插入或缺 失等手段改变蛋白质分子中特定的氨基酸。从而 鉴定出与酶特性相关的关键残基和结构元件。理 性设计的方法有寡核苷酸介导的重组 PCR, 限制 性内切酶酶切片段取代法, 盒式突变法和化学合 成法[1]。与使用化学因素、自然因素导致突变的方 法相比,定点突变具有突变率高、简单易行、重复 性好的特点。这一技术在优化酶特性方面占有重 要地位。近几年已利用定点突变技术对天然酶蛋 白的催化活性[2- 3]、底物特异性[4- 6]、稳定性[7]、改变 抑制剂类型[8]、辅酶特异性[9]、提高表达量[10- 1