螺旋体、支原体、衣原体、立克次体2013.10PPT.ppt

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螺旋体、支原体、衣原体、立克次体2013.10PPT

检验程序:图17-3 标本采集:痰、咽拭、鼻咽洗液、支气管分泌物,以拭子为好 标本直接检查:电镜观察、PCR检测 分离培养与鉴定: 牛心消化液+20%小牛血清+新鲜酵母浸液 加醋酸鉈、青霉素等抑制细菌生长 5%CO2,培养10~20天(不利于临床快速诊断) 鉴定: 典型菌落、发酵葡萄糖、不利用精氨酸和尿素 还原美兰和TTC、吸附红细胞等 抗体检测 ELISA:检测P1蛋白,敏感性和特异性好 补体结合试验 双份抗体效价升高4倍以上?诊断 主要检测IgM 间接血凝试验(IHA) 测抗体, 2~3周高峰 检测IgM抗体,特异性不高 冷凝集试验 非特异冷凝集素 人感染支原体后,血清中出现的一种IgM型非特异性抗体(冷凝集素)。在4°C条件下可凝集人O型红细胞。 冷凝集素效价升高可在传染性单核细胞增多症和支原体所致的非典型性肺炎 抵抗力 对热抵抗力与一般细菌相似 耐冷,-70℃可长期保存 4℃存活不超过3天 对干燥敏感 无细胞壁,对β-内酰胺类药物耐药;对作用于菌体蛋白合成的抗生素敏感 微生物学检查 分离培养 血清学诊断--冷凝集实验、补体结合、间接血凝试验 快速诊断(ELISA-检测抗原、抗体) (基因—PCR检测DNA) 解脲脲原体 (Ureaplasma urealyticum,Uu) 解脲脲原体又称溶脲脲原体,支原体T株 1954年Shepard 首先从非淋菌性尿道炎患者的尿道分泌物中分离获得 是人类泌尿生殖道中最常见的寄生菌 T株 临床意义 Uu寄居于人泌尿生殖道 所致疾病——非淋菌性尿道炎(NGU) 主要传播途径是性传播和母婴垂直传播 Uu的致病机制 侵袭性酶 磷脂酶——分解细胞膜中的磷脂 尿素酶——分解尿素产氨,产生细胞毒性作用 IgA蛋白酶——降解粘膜表面的IgA 毒性代谢产物 微生物特性 形态结构 以球形为主 革兰染色阴性,Giemsa 染色呈紫蓝色 无细胞壁,细胞膜为三层膜结构 解脲脲原体 微生物特性 培养特性 营养要求较高,生长需要胆固醇、酵母和尿素。不分解葡萄糖和精氨酸,利用尿素产碱 最适温度37℃,最适pH5.5~6.5, 5% CO2 在固体培养基上,2天可形成极小的菌落(Tiny colony strain)所以称T株 抗原构造: 脂多糖抗原和蛋白质抗原 脲酶抗原——是Uu的种特异性抗原 分离培养 采用pH5.5~6.5的液体培养基,内含尿素和酚红指示剂。37℃培养,培养基颜色由黄变红,判为阳性 鉴定 培养和形态特征 分解尿素、不分解葡萄糖和精氨酸 MIT和GIT 人型支原体(M.hominis) Mh主要寄居于生殖道,女性携带率高 通过性接触传播 引起妇科疾病或新生儿感染 形态结构与解脲脲原体相似 分解精氨酸,不分解尿素和葡萄糖 固体培养基上可形成典型“油煎蛋”样菌落 MYCOPLASMA IST 2 方法 R1 R2 运送 溶解 R1+R2 接种试剂条(55 μl) + 2滴矿物油 O Uu Mh Uu Mh 104 104 4 2 1 1 4 1 0.12 1 2 Mycoplasma IST2 37°C培养24~48 h MYCOPLASMA IST 2 鉴定 生长对照: 首先判断 如果(+) è 观察其他孔 如果(-) è不再判断 1孔鉴定解脲脲原体: 高浓度林可霉素抑制Mh生长 1孔鉴定人型支原体: 高浓度红霉素抑制Uu生长 红色 è 阳性 (+) 黄色 è 阴性 (-) MYCOPLASMA IST 2 计数 原理 : 含标准抑制剂浓度104 CCU (颜色变化单位) 致病临界值, 常用 结果: 如果标本中菌数等于或大于104 颜色发生变化 红色 (+) è 计数 104 CCU 黄色 (-) è 计数 104 CCU Uu : 结果判断必须在20和24 h Mh : 结果判断在 24和48 h后 MYCOPLASMA IST 2 药敏试验 治疗常用的9种抗生素: 环素类: 四环素和多西环素 大环内酯类: 交沙霉素, 红霉素, 阿奇霉素,克拉霉素 喹诺酮类: 氧氟沙星, 环丙沙星 林可酰胺类: 原始霉素 检测 2个浓度: 结果以S, I, 或 R表示 MYCOPLASMA IST 2 结果判断 首先检查尿素- 精氨酸肉汤: 确认肉汤不混浊(污染) 观察颜色 试剂条: 即使颜色由黄色至橙黄色轻微变化也应判断为阳性 除计数孔:阳性结果必须是红色 特殊情况 : 肉汤 试剂条 - + 试剂条污染 /或操作不正确 + - 支原体量少 用A7琼脂确认 穿通支原体 (M.Penetrans,Mpe) 1990年从AIDS患者尿中分离出Mpe 能吸附宿主细胞

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