通过响应面分析法优化超声提取泽泻中多糖以及测定其抗氧化性精选.docVIP

通过响应面分析法优化超声提取其℃保持75.2分钟，水料比为 30.1ml/g。在这样的条件下，产量为6.9%，这远远高于传统的热水提取的产量（3.41%）。逐步乙醇沉淀的RAPs 表现出很强的抗氧化性。结果表明超声提取是一种非常高效的提取RAP的方法，并且多糖可以作为一种用于医药以及功能保健食品的潜在的抗氧化剂来研究。 引言 泽泻(RA)是东方泽泻(Sam)的根状茎。Juzep属于泽泻科，主要分布于中国，日本和印度（Han et al.,2013；Wu ,2005）。在古代中国的第一部药学著作《神农本草经》中，RA作为一种优质药材被记载（Gu ,2007)。作为一种民间药物，它用于治疗高血压，高血脂和糖尿病（China, 2005; Li Qu, 2012; Wu, 2005），并且作为传统中草药之一包含在药典之中（China ,2005)。最近，对RA的研究兴趣日渐高涨。因为据报道，它的许多成分比如三萜烯，泽泻醇B，特别是多糖具有重要的生物活性，包括抗HCV，抗炎，降血糖以及免疫效应（Han et al., 2013; Jiang et al.,2006; Lee et al., 2013; Li Qu, 2012; Shimizu, Ohtsu, Tomoda,Gonda, Ohara, 1994; Tomoda, Gonda, Shimizu, Ohara, 1994)。 RAP因其对脂质的抗氧化有抑制作用而被记录，后者对人体健康具有潜在的重要性。然而，几乎没有关于有效提取RAP的研究。常见的方法比如通过热水，浸入以及索氏提取法，往往既费时又昂贵，而且所获得的RAP量极低，甚至会造成某些药理学作用的丧失(Li, Ding, Ding,2007; Wang, Cheng, Mao, Fan, Wu, 2009)。超声提取技术具有很多优点，比如相当高的提取量，温和的溶解环境，相对短的提取时间，等等，因此，已经被用于从植物材料中提取优质生物活性的多糖(Hromadkova Ebringerova, 2003; Hromadkova, Ebringerova, Valachovic, 2002;Pan et al., 2010; Ying, Han, Li, 2011 )。所以，超声提取技术被用来提高RAP的提取量而产生对生物活性最小的影响。为了将这种技术应用于RAP，我们用响应面分析法对提取环境和步骤进行了优化，响应面分析法是当多种因素和反应可能对提取量产生影响时优化反应过程的一个高效手段(Box Wilson, 1951; PrakashMaran, Manikandan, Thirugnanasambandham, Vigna Nivetha, Dinesh, 2013)。响应面分析法的主要优势在于相当程度得减少了评价多元变量和它们之间反应可能需要的试验的次数，使得优化过程比其他方法更加简化。 在此次研究中，基于单因子实验的结果，三个主要的影响因子（超声提取时间，水料比，超声提取温度）被用来优化超声提取RAP的实验条件。根据不同分子量的多糖在乙醇中有不同的溶解度，我们用逐步乙醇沉淀法获得了两种主要的多糖，它们都表现出强抗氧化性。 材料和方法 2.1、材料 从黑龙江省采集的泽泻，从西格玛化工有限公司购买的DPPH，从西格玛-奥德里奇购买的葡萄糖，超纯水。 2.2、RAP的提取和产量的确定 将干燥的RA用研磨机研磨成粉末(WND-200, Weinengda Instrument Co., Ltd., Zhejiang, China),然后根据我们之前的工作，在60℃下用85%乙醇抽提三次，每次五个小时，去除脂质，色素，氨基酸，单糖和寡糖(Zhao, Xu, Ye, Dong, 2013)。未溶解的部分通过过滤和干燥从溶剂中分离出来(60 ?C, 24 h)。接着在一个特定的超声提取时间，水料比和提取温度下，通过超声清除器利用经过最小程度修改的Zhao et al. (2013) 和 Prakash Maran et al. (2013)的方法将多糖从预先处理的干燥粉末中抽提出来。 上清液通过真空过滤从未溶解的残留物中分离出来，接着用谢瓦格法处理(Jia et al.,2014; Sevag, Lackman, Smolens, 1938)三次以去除蛋白质 ，然后集中透析两天去掉蒸馏水(cut-off Mw 3500 Da)。形成的溶液加入无水乙醇产生沉淀，最终浓度为80%，置于4℃下过夜。通过离心赫尔冻干将沉淀物收集起来获得RAP。用硫酸苯酚比色法以葡萄糖为标准测量糖含量(Balavigneswaran,Sujin Jeba Kumar,Moses Packiaraj,Veerara