维生素B12注射液含量测定的改进.docVIP

精品论文 参考文献 维生素B12注射液含量测定的改进 李群 (淄博市食品药品监督管理局高新区分局 255000) 【摘要】 目的 建立维生素B12注射液的含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法，紫外检测器，C18柱，流动相分别为：甲醇-水（30-70）检测波长361nm，流速：1.0mL?min-1:进样体积：10mu;L，柱温：30℃。结果　维生素B12在21.2mu;g/mL～212mu;g/mL范围内与相应峰面积呈良好的线性关系r=0.9998 (n=5) 平均回收率99.7%（RSD=0.53%，n=6）。方法可靠、简便、专属性强、重现性好。可作为维生素B12注射液的含量测定方法。 【关键词】 维生素B12 高效液相法 含量测定 维生素B12是一种水溶性维生素，常见抗贫血药。其注射剂《中国药典》2005年版和2010年版都采用紫外分光光度法测定含量，影响因素较多，重现性差，专属性不强，本试验采用高效液相法检测维生素B12含量较好的解决了这些问题，建立了HPLC法测定维生素B12注射液含量。 1.仪器与试药 Aglient1200 型高效液相色谱仪，紫外检测器，普利赛斯92SM-202A电子天平。 维生素B12对照品有国家药品生物制品鉴定所提供（批号：100248-200201，纯度100%），实验用水为自制纯化水，甲醇为色谱纯，维生素B12注射液（林州市亚神制药有限公司，3批，编号①②③）。 2.方法和结果 2.1色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18柱（150times;4.6mm，5mu;m）；流动相：甲醇-水（30:70）；检测波长：361nm；流速：1.0 mL?min-1；进样量：10mu;L,柱温：30℃；理论塔板数：以维生素B12峰计不低于3000。 2.2对照品储备液 避光，精密称取减压干燥4小时维生素对照品0.0106g,置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 2.3供试品溶液的制备 避光，精密吸取样品5mL，置25mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀；作为供试品。 2.4阴性供试品的制备 按处方（不含维生素B12）制备样品，按2.3项方法处理即得。 2.5系统性试验 分别取对照品、供试品溶液、阴性供试品溶液各10mu;L注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图；结果见附图1。在此条件阴性供试品无干扰，维生素B12可达到基线分离，分离度R＞1.5。 2.6线性与范围 精密量取储备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0mL，分别置于10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，进样，记录色谱图。以峰面积（A）对浓度（C）线性回归，回归方程为A=10.292C，r=0.9998。表明维生素B12在21.2～212mu;g?mL-1范围内线性关系良好。 2.7精密度试验 精密吸取对照品溶液10mu;L重复进样5次，峰面积分值的RSD=0.9%。 2.8加样回收率试验 精密称取已知含量的样品5份，分别精密加2.2项下等量的对照品溶液，按2.3项下的方法处理，分别测定，计算回收率，平均回收率为99.7%，RSD为0.53%（n=6）。 2.9含量测定 取对照品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取三批样品，按供试品溶液制备，同法操作，测定样品含量，与药典标准照紫外分光光度法361nm波长测定吸光度计算含量并比较，结果见表1。 表1 样品测定结果（n=3）（含量为表示百分含量） 3.讨论 3.1本方法先采用流动相，先采用水-乙腈-三乙胺（含5mmoL庚烷磺酸钠，用磷酸调PH至3.5）（81:19:0.3）为流动相，发现峰形不好，且流动相配制较为繁琐，根据平时工作经验将流动相改为甲醇-水（30:70）结果峰形较好，出峰较快。 3.2???紫外图谱可知，维生素B12在361nm和550nm处均有最大吸收，但550nm处的吸收值较低，样品取样量较大，因此本文采用在361nm波长处检测。 参 考 文 献 [1] 国家药典委员会《中国药典》2005年版[S].北京:化工出版社. [2] 国家药典委员会《中国药典》2010年版[S].北京:化工出版社. 附图一