抗CDlt3gt单克隆抗体和rIL2协同活化PBMC抗肿瘤的体外实验研讨.pdfVIP

吉林省第四届科学技术学术年会 1125 抗肿瘤的体外实验研究 张赢予 张馨木 张磊 (吉林大学再生医学科学研究所生物化学研究室长春130021) 摘 要：目的：对抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞(CD—tK)的体外抗肿瘤活性进行观察。方法：采用 在培养第7到22天，增殖倍数显著；抗肿瘤适宜的效靶比为20：1；培养天数在7～16天之内，杀伤肿瘤活 性最强。CD3AK作为新型抗肿瘤免疫细胞，在肿瘤过继性免疫治疗中有着广泛的应用前景。 关键词：抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞杀瘤活性 CD3分子表达在所有的T细胞表面，是T细胞表面所特有的标志。CD3分子和T细胞膜上的T细胞受 结合抗原后，将激活信号传人细胞内，诱导T细胞活化【n。早期的动物实验显示，针对CD，分子￡链单克隆 抗体能诱导小鼠杀伤性T细胞活化，并能进行长期培养。 在一些辅助细胞存在的情况下，OKT3能够激活人外周血中的T淋巴细胞。Garrido等报导过一种使 用抗CD3单克隆抗体加IL一2高效诱导的CDs+和CD4+CTL体系。TakashiNishimura等也报导了由抗CD3 单克隆抗体加rlL-2诱导的具有辅助和杀伤功能的CD4CF细胞的快速增殖培养体系l21。 monoclonalactivatedkiller 抗CD3单抗激活的杀伤细胞(Anti—CD3antibody cells，CDrAK)是继淋巴因子 激活的杀伤细胞(LAK)和肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)之后又一类更为有效的抗肿瘤效应细胞，具有扩增能力 强、体外存活时间较长、细胞毒活性高、分泌淋巴因子的能力强和体内外抗肿瘤效果显著等优点。临床应 用具有很好的前景。本实验对CD—kK细胞的制备及长期培养和抗瘤活性进行研究，为进一步的临床应用 提供理论依据。 1材料与方法 1．1 材料 仪器：超净工作台、相差倒置显微镜、高速离心机、5％C02培养箱、EPICSXL—ADC流式细胞分析仪、 1640培养基、CD3单克隆抗体(OKT3)、人重组自细胞介素2(rlL_2)。 1．2方法 用RPMI—1640培养液调整细胞密度为lxl∞／L。 离PMBC，用含有10％AB血清、2mmol／l谷氨酰胺、10mmol／1 1126 增强自主创新能力 促进吉林经济发展 500 U／m的1640培 RPMI一1640培养液，置于37。C，5％C02培养箱培养；每3，d换液一次，换液时加含rlL-2 养液，计数并调节细胞悬液浓度为lxl09／L，培养22d。 计数．计算扩增倍数。 靶细胞制备：Hela，SMMC一7721细胞株培养至对数生长期，消化后制成悬液；细胞计数，并稀释至所需的细 胞浓度；分别接种于96孔板中，置于37℃，5％C0：培养箱培养24h，使其充分贴壁生长；细胞贴壁后，轻轻 倾去培养液，加PBS洗涤，倾去洗涤液及未贴壁细胞。效应细胞的接种：向96孔板中分别加入培养的 胞的杀瘤活性。 min，加入标 (5)CD3AK特异性的流式细胞术(rCM)鉴定。细胞洗涤后，将细胞置固定／破膜溶液中30 记抗体，于4℃反应20min；流式细胞仪测定结果。 11．0软件包进行t检验。 (6)实验数据的统计处理。全部数据采用SPSS 2 结果 2．1 CDAK细胞培养体系的建立、 在相差倒置显微镜下，观察分离的健康人外周血淋巴细胞，可见细胞形态良好，元杂质和细胞碎片； 培养第3天后，可见体积增大、多行性、胞核明显增大的转化细胞；随着培养天数的增加出现典型细胞集 落，并有长成一定细胞密度而形成的单层细胞。 2．2 OKT3诱导T淋巴细胞的增殖动力学 见表1。表1显示，在培养第7到22天，CD3AK增殖倍数显著。 表1