微生物限度检查法增修订内容.ppt

中国药典2005版微生物限度 检查法增修定内容 苏德模; 中国药典2005版微生物限度检查法在检查项目、格式、语言表述等方面都有较多的增定和修订。 增订中主要的有四项：一是三菌数测定的方法验证；二是控制菌检查的方法验证；三是大肠菌群检查法；四是梭菌检查法。 前言 增订 ●微生物限度检查在环境的洁净度10000级和局部100级的单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，以防再污染。单向流空气区域、工作台面及环境必须定期按国家《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌测试方法》现行标准进行洁净度验证。隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。 ;●培养基、稀释剂、实验器具等的灭菌，按灭菌法（见附录 XVII ）的要求采用验证合格的灭菌程序灭菌。 (培养基配制、灭菌、质量与使用) 培养温度 细菌和控制菌的培养温度未改动。霉菌和酵母菌的培养温度20-25℃ 改为 23-28℃。 抽样量和检验量虽分别单列，但突出的是检验量。 以检验量为标题，抽样量列在检验量叙述完了之后。 即一般随机抽样不少于检验用量（2个以上最小包装）的3倍量。 ●检验量 指供试品一次检验的用量。一般为10g或10ml；化学药膜剂为100cm2；贵重或微量包装的药品可酌减（不得少于3g）。检查沙门菌的供试品其检验量增加10g或10ml。 ; 培养基、试药、试液、指示液、稀释剂的配制和微生物限度标准均编排在检查法后。英美药典将培养基、稀释剂放在供试液制备之前。 ●供试液的制备 用pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制备供试液或选用适宜的乳化剂、分散剂、中和剂制备供试液；其用量应验证，在该检验条件无抗菌作用。供试液制备妥后不得超过1h就加入检验用培养基。 7类供试品供试液的制备，其中非水溶性供试品 ①供试品5g，司盘80、单硬脂酸甘油酯、聚山梨酯80…… ●②供试品10g，20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠，必要时再加适量十四烷酸异丙酯，充分振摇，使供试品溶解。然后加45℃100ml pH7.0蛋白胨氯化钠缓冲液，振摇5-10分钟，萃取，待油水分层后，水层过滤，贴膜培养。 ;●非水溶性膜剂供试品 二部未变动，化学药膜剂取100cm2，剪碎，加100ml pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，作供试液(1:1)。一部中药膜剂取50 cm2，剪碎，适量的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲溶液（50或100ml）浸泡，振摇，以供试品浸液为供试液。（SOP2000版规定:中药膜剂取30-50cm2 ，剪碎，加水100ml）。 ●肠溶及结肠溶制剂 供试品10g，加100ml pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（肠溶制剂）或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液（结肠制剂）,于45℃水浴振摇，使溶解。 ;②离心沉淀集菌法 取规定量的供试液，3000转/分离心20min（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5min，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量。 ③薄膜过滤法 采用开放式薄膜过滤器。 ④中和法 凡含汞、砷或防腐剂等具有抑菌作用的供试品，可用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。中和剂或灭活剂可加在所用的稀释剂或培养基中。 ;细菌、霉菌及酵母菌计数 增订 计数方法的验证 对药品进行微生物限度检查法时，首先应进 行检测方法的验证。如细菌、霉菌及酵母菌 计数方法的验证，以确认该计数方法是否科 学、准确、客观（产品质量）。若供试品的 组分或原检验 条件发生改变可能影响检验 结果时，计数方 法应重新验证。验证时，按供试液的制备， 细菌、霉菌和酵母菌计数所规定的方法及下 列要求进行。对各试验菌的回收率应逐一进 行验证。 ; 验证用菌株及菌液的制备 菌株（代表性） 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念株菌、黑曲霉菌。 菌液制备（菌种传代、保存及使用5代） 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌接种营养肉汤，白色念株菌接种真菌培养基、黑曲霉接种真菌培养基斜面，置规定温度、时间，培养。取培养物用0.9%无菌氯化钠溶液稀释成1ml含50~100cfu的菌液。 （黑曲霉菌液制备、比浊法计数） ; 验证方法 试验组 取规定量最低稀释级的供试液1ml，和50~100cfu试验菌，每株菌做2个平板，按平板菌落计数方法测定其菌数。采用薄膜过滤法