扫描电镜与透射电镜.pptVIP

（一）一般光学显微镜术 镜下结构称光镜（light microscope LM) 结构； 放大倍数1000倍； 分辨率0.2μm； 组织制成薄片，以利光线通过。 1.石蜡切片术(paraffin sectioning) 制片过程 （1）取材（1.0cm) 固定(甲醛） 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 浸蜡包埋 切片（5－10 um） 展片； （2）脱蜡（二甲苯） 酒精（高-低） 水 苏木精-伊红染色 酒精脱水（低-高） 透明（二甲苯） 封片（树胶） 2.特殊染色方法 银染：用硝酸银将神经细胞染为黑色。 醛品红染色：将弹性纤维染为紫色。 甲苯胺蓝：将肥大细胞的分泌颗粒染为紫色。 活体染色：取动物组织材料之前活体注射染料，观察巨噬细胞的吞噬情况。 3.其他制片方法 冰冻切片：组织液氮骤冷，恒冷箱切 片机切片(糖类、脂类、酶、核酸等）。 涂片：将游离的细胞直接涂于切片上。 铺片：将疏松结缔组织或肠系膜等撕 成薄片铺在载玻片上。 磨片：骨和牙等硬组织可磨为薄片。 疟疾破坏的两个红细胞 PAS反应： (periodic acid Schiff reaction) 显示多糖和蛋白多糖的常用方法，又称过碘酸一雪夫反应。过碘酸先将糖分子的乙二醇基氧化为乙二醛基，后者继而与Schiff试剂结合，形成紫红色反应产物。 * * （3）染色(staining)： 是用染料使无色组织切片着色，增加对 比度， 便于镜下观察。染色方法很多，但没有一种 能使细胞全部结构同时着色。 常用的染色方法： 苏木精（hematoxylin）：细胞核和胞质内的嗜 碱性物质着蓝紫色 。 伊红（eosin）：细胞质基质和间质内的胶 原纤维等着红色。 H.E 1.透射电子显微镜技术(transmission electron microscope TEM) 透射电子显微镜技术的组织须用戍二醛或锇酸固定，树脂包埋，超薄切片(厚50～80nm），再经铅盐等重金属盐染色后，在透射电子显微镜下观察。 电镜下所见的结构称超微结构(ultrastructure)，被金属所染部位，荧光屏上显得暗，图象较黑，称为电子密度高；反之则称为电子密度低。 被检结构和重金属盐相结合的称正染色；被检结构本身不与重金属盐结合，而其周围染上重金属盐的称负染色。一般染色都是正染色。 (二)电子显微镜技术 (electron microscopy) 光镜：分辨率为0.2μm，放大倍数约为1000倍； 电镜：分辨率为0.2nm，比光镜高1000倍，可放大几万倍到几十万倍，因此电镜能观察到细胞的更微细结构。 在光镜与电镜下进行观察，常用的长度计量单位为毫米（mm）、微米（μm）和纳米（nm）。 这些单位间的关系如下：μm(微米)＝10-3mm(毫米)；nm(纳米)＝10-3μm(微米) 2.扫描电子显微镜技术（scanning electron microscope） 扫描电子显微镜技术要观察的组织不需制成切片。 固定后的标本，在其表面喷镀金，在荧光屏上即可显示细胞或组织表面的立体结构。 如细胞表面的突起、微绒毛、纤毛等。 临床分离葡萄球菌L型 葡萄球菌L型回复后 细菌L型 菌落类型 电镜照片 形态与结构 1、透射电镜 ：观察组织、细胞内部超微结构。 分辨率0.2nm。 标本制备：1、固定 （戊二醛与锇酸等） 2、包埋（树脂） 3、切片（50-80nm) 4、染色（醋酸铀和柠檬酸铅等重金属） 标本在荧光屏上呈黑白反差的结构影像。 电子密度高、电子密度低：被重金属浸染呈黑色的结构，称电子密度高；反之，浅染的部分称电子密度 细胞膜 为于细胞壁内紧包细胞质，结构与真核细胞基本相同。 功 能 形态与结构 细胞膜电镜照片 分泌呼吸 载体蛋白 脂质双层 细胞膜 模式结构图 物质转运 生物合成 白喉杆菌 细胞膜与中介体 中介体 部分细胞膜折叠形成的向内陷入细胞质中的囊状物 功 能 类似真核细胞线粒体，为细菌提供大量能量。 Mesosome 异染颗粒 质粒 细菌核蛋白体 电镜照片 形态与结构 特殊结构 荚 膜 化学组成： 功能： 肺炎链球菌 产汽荚膜杆菌 肺炎链球菌 形态与结构 Capsule 多糖或多肽 抗吞噬作用 粘附作用 抗有害物质损伤作用