灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸的研讨.pdf

灵芝真菌发酵生产灵芝多糖和灵芝酸的研究 方庆华 钟建江 华东理工大学生物反应嚣工程国家重点实验室上海市200237 抽要：本文提出了是芝真菌发酵同时高教生产灵芝多糖和是芝酸的过程，并主要考察丁摇瓶发酵中起 始糖’恭度对灵芝细胞生长及灵芝多糖和是芝酸积累的影响．在50g／L起始糖浓度下，细胞干重选到16．7 glL，0．85g／L和212mg／L．是芝酸的产量和产 g／L，同时胞内多耱、胞外多耱和是芝醚分别速1．19 率为至母嘲．道的最高值． 引言 灵芝为担子菌纲、多孔菌科、灵芝属真菌，自古以来就是我国名贵药用真菌，具有抗肿瘤、降 低血液中胆固酵含量、抗炎症等药效。现代医学研究发现灵芝中主要生理活性成分是灵芝多糖和灵 芝酸。但是至今灵芝液体发酵研究主要集中于灵芝多糖的生产。 本文就灵芝真菌液体发酵，提出了同时高效生产灵芝多糖和灵芝酸的发酵过程[1]．并详细考 察了灵芝悬浮细胞培养过程中起始糖浓度对细胞生长和产物合成的影响，为大规模发酵生产奠定基 础。 l、材料和方法 1．1菌株和实验条件 灵芝从中国微生物傈藏中心购得。斜面菌种在28。C葡萄糖一土豆汁一琼脂斜面中培养。种子培养 0．05。 基成分为(g／L)：蔗糖35，蛋白胨5，酵母膏2．5．磷酸二氢钾1．O，硫酸镁0．5．和维生素B1 发酵在250mL摇瓶(含50mL培养基，30。c，摇床转速120rpm)中进行。 1．2分析方法 培养所得细胞经充分洗涤，离心后收集，烘干至干重，称量得细胞干重。培养基中葡萄糖用葡 萄糖试剂盒测定，蛋白质用Lowry法测定。灵芝胞外多糖(EPS)用乙醇沉淀后碱溶，再用浓硫酸一 苯酚法测定。灵芝胞内多糖(IPS)用热碱提取后，再用浓硫酸一苯酚法测定。灵芝酸(GA)测定通 过分光光度法测定[1]。 2、结果与讨论 2．1起始糖旅度对细胞生长的影响 在起始糖浓度为20，35，50和65g／L条件下，细胞量分别在第6，8，10和10天达到最大， 其最大细胞干重分别为lO．8，14．1，16．7和12．6g／L。但随着起始糖浓度的增加，细胞平均生长 g／t条件下，细胞平均生长速率为5．8、5．7、5．5 速率明显降低。在起始糖浓度为20，35，50和65 g／L葡萄糖造成的渗透压分别为2．76、 和4．1d_【(表1)。根据文献[2]推算可知，20、35、50和65 4．83、6．90和8．97大气压。这一结果暗示细胞生长受到高起始糖浓度引起的渗透压的抑制。在其 他培养过程中也有类似现象报道。 另外．细胞团颗粒受到起始糖浓度影响。在起始糖浓度为65g／L条件下，58．1％的细胞团颗粒 6咖。而在起始糖浓度为20g／L条件下， 直径小于1．2m，而只有14．6％的细胞团颗粒直径大于lI 2响，而却有55．3％的细胞团颗粒直径丈于1．6mm。这个结果暗示 15．1％的细胞团颗粒直径小于L 由于高起始糖浓度导致的高渗透压造成细胞团颗粒变小。Zhang等曾报道经过高浓度葡萄糖处理的 三七细胞团颗粒明显变小[3]。 0 表1．起始糖浓度对细胞生长、细胞得率以及灵芝胞内多糖(IPS)、胞外多糖(EPS) 和灵芝酸(GA)积累的影响‘ 起始糖浓度(g／L) ．20 35 50 65 最大细胞干重(g／L) i0．8士0．3514．1+0．1316．7士0．0912．6±0．12 细胞得率(gDW／g 0．50 0．42 0．35 glucose)0．58 细